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    小鼠腫瘤壞死因子 ELISA 檢測試劑盒說明書

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                              小鼠腫瘤壞死因子 ELISA 檢測試劑盒說明書

      小鼠腫瘤壞死因子試劑盒是夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知小鼠腫瘤壞死因子濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將小鼠腫瘤壞死因子和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中小鼠腫瘤壞死因子的濃度呈比例關系。

    操作步驟:

    1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

    2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。

    3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

    4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

    5. 每孔加入50ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

    6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

    7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

    8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

    9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

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