流式細(xì)胞術(shù)抗體特異性常見的驗(yàn)證方法

常見的流式細(xì)胞術(shù)抗體特異性驗(yàn)證方法：

1、免疫熒光染色共定位：使用該抗體與已知針對(duì)同一細(xì)胞結(jié)構(gòu)或分子但標(biāo)記不同熒光素的另一種抗體同時(shí)進(jìn)行染色。通過觀察兩種熒光信號(hào)的共定位情況，如果高度重合，說明該抗體具有較好的特異性。

2、競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)：在抗體染色前，先加入過量的未標(biāo)記的相同抗原，然后再加入標(biāo)記的抗體進(jìn)行染色。如果特異性高，過量的未標(biāo)記抗原會(huì)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致標(biāo)記抗體的結(jié)合減少，熒光信號(hào)降低。

3、敲除或沉默基因驗(yàn)證：對(duì)于檢測(cè)特定基因表達(dá)產(chǎn)物的抗體，如果有條件，可以在細(xì)胞中敲除或沉默相應(yīng)的基因，然后用該抗體進(jìn)行染色。如果基因敲除或沉默后抗體檢測(cè)不到信號(hào)或信號(hào)顯著降低，說明抗體特異性良好。

4、抗原親和純化：利用固定有相關(guān)抗原的親和層析柱來純化抗體，如果純化后的抗體在后續(xù)的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)中表現(xiàn)出與預(yù)期一致的特異性結(jié)合，可證明其特異性。

5、細(xì)胞分群驗(yàn)證：對(duì)于已知在不同細(xì)胞亞群中有特異性表達(dá)或差異表達(dá)的抗原，檢測(cè)該抗體在這些細(xì)胞亞群中的染色情況是否符合預(yù)期，來判斷其特異性。

6、抗體稀釋實(shí)驗(yàn)：逐步稀釋抗體，觀察熒光信號(hào)的變化。如果在一定稀釋范圍內(nèi)，信號(hào)強(qiáng)度與抗體濃度呈線性關(guān)系，且在低濃度時(shí)仍能特異性結(jié)合，說明抗體特異性較好。

7、檢測(cè)不同物種細(xì)胞：如果抗體是針對(duì)保守的抗原表位，檢測(cè)不同物種來源但具有相同抗原的細(xì)胞，觀察抗體結(jié)合情況是否一致，來評(píng)估其特異性。