H9細(xì)胞消化液操作說(shuō)明

操作說(shuō)明：

1. 將H9全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫，取出包被過Matrix的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量全培養(yǎng)基，置于5% CO2的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

2. 吸走待傳代細(xì)胞培養(yǎng)皿/瓶中的iPS全培養(yǎng)基，并且加入無(wú)鈣鎂的PBS溶液洗一次。

3. 加入0.5mM EDTA傳代工作液使之全覆蓋皿/瓶底。

4. 室溫放置5 ~ 8 min或37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育3 ~ 5 min，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部大部分細(xì)胞間出現(xiàn)間隙但尚未相互分離，肉眼觀察到細(xì)胞集落變得不透明且發(fā)白，表明細(xì)胞消化時(shí)間理想。

5. 吸去傳代工作液，即刻加入新鮮的H9全培養(yǎng)基，用移液器扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的干細(xì)胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻。

 注：吹吸的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)總共不超過10次為宜。吹打過度導(dǎo)致大量單細(xì)胞出現(xiàn)是造成細(xì)胞分化或死亡的重要原因。

  注：如有少量細(xì)胞無(wú)法從皿底脫落，屬于正常現(xiàn)象。如有大量細(xì)胞無(wú)法從皿底脫落，需延長(zhǎng)消化時(shí)間。

6. 顯微鏡下觀察細(xì)胞呈4 ~ 20個(gè)細(xì)胞大小的團(tuán)塊，水平十字搖勻。

7. 將細(xì)胞置于5% CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

8. 每天換液直至達(dá)到可以傳代的標(biāo)準(zhǔn)。

注意事項(xiàng)：

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。