RNA的提取與核酸的顏色反應操作步驟

RNA的提取與核酸的顏色反應操作步驟:
1. 取材
在天平上準確稱取干酵mu 3.00g，轉移至100mL錐形瓶中。
2. 濃鹽浸提
取 27mL 10%NaCl溶液，加入到含干酵mu 的錐形瓶中，攪拌均勻；置于90～100°C水浴中，浸提30～60分鐘；冷卻。
3. 離心
將錐形瓶中提取液和沉淀全部轉移至100mL離心管中，取10mL H2O洗滌錐形瓶，并入離心管中；平衡后以4000轉/分鐘離心 15分鐘；將上清液（即RNA提取液）傾入50mL燒杯中，棄去沉淀（菌體殘渣）。
4. 沉淀RNA
(1) 冷卻：將50mL燒杯置于放有冰塊的250mL燒杯中冷卻；將溫度計插入50mL燒杯中，待溶液冷至10°C以下時，取出溫度計。
(2) 調pI：緩慢滴加 6NHCl于50mL燒杯中，用玻棒一邊輕輕攪拌溶液，一邊測量pH值，調節溶液pH至2.0～2.5范圍，溶液中白色沉淀逐漸增多，到等電點時沉淀量最多；繼續在冰浴中靜止15分鐘，使沉淀充分。
（注意：①嚴格控制pH；②若攪拌過快核酸難以凝聚沉淀。）
5. 離心
將小燒杯中溶液和沉淀移至離心管中，再次平衡、離心（4000轉/分鐘，15分鐘）；棄去上清液，保留RNA沉淀。
6. 洗滌與抽濾
(1) 洗滌：取10mL 95%乙醇加到含RNA沉淀的離心管中，懸浮沉淀，浸泡5分鐘。
(2) 抽濾：取大小合適的濾紙，先在數字顯示天平上稱重；然后放入布氏漏斗中，用少量乙醇濕潤濾紙，開啟真空泵，使濾紙貼緊漏斗，將沉淀及溶液全部轉移至布氏漏斗內；再用15mL 95%的乙醇洗滌離心管，淋洗濾渣。
7. 干燥
用小鑷子取出布氏漏斗中的沉淀物和濾紙，轉移至表面皿上，置于80°C烘箱內干燥。
8. 稱重
取出樣品，在室溫下冷卻數分鐘后，將沉淀物及濾紙置于數字顯示天平上稱重。
9. 顏色反應
(1) 溶解：取50mL水溶解RNA沉淀，同時加2滴NaOH助溶。
顏色反應：取4支潔凈、干燥的試管，按下表所示順序操作