兔ELISA試劑盒基本原理方法

兔ELISA試劑盒基本原理：

①抗原或抗體能吸附到固相載體表面，并保持其免疫學活性；

②抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，仍保持其免疫學和酶學活性；

③酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。

兔ELISA試劑盒操作步驟：

1.使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4.甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6.甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8.取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案：

6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到精確的結果。