elisa試劑盒檢測(cè)熒光定量PCR的幾種方法比較

進(jìn)口elisa試劑盒常見(jiàn)熒光定量PCR方法比較
一、SYBR Green I檢測(cè)模式 是一種能與雙鏈 DNA 結(jié)合發(fā)光的熒光染料。其與雙鏈 DNA 結(jié)合后， 熒光大大增強(qiáng)。因此， SYBR Green I 的熒光信號(hào)強(qiáng)度與雙鏈 DNA 的數(shù)量相關(guān)，可以根據(jù)熒光信號(hào)檢測(cè)出 PCR 體系存在的雙鏈 DNA 數(shù)量。SYBR Green I 的zui大吸收波長(zhǎng)約為 497nm，發(fā)射波長(zhǎng)zui大約為 520nm。PCR 擴(kuò)增程序一般為 94℃～55℃～72℃三步法，40 個(gè)循環(huán)。SYBR Green I 的缺點(diǎn)：由于 SYBR Green I 沒(méi)有特異性，不能識(shí)別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會(huì)結(jié)合發(fā)光，對(duì) PCR 反應(yīng)中的非特異性擴(kuò)增或引物二聚體也會(huì)產(chǎn)生熒光，通常本底較高，所以在臨床上使用可能會(huì)有假陽(yáng)性發(fā)生。SYBR Green I 的優(yōu)點(diǎn)：SYBR Green I 的優(yōu)點(diǎn)是因?yàn)槠淙秉c(diǎn)產(chǎn)生，由于它能所有的雙鏈DNA相結(jié)合，所以對(duì)不同模板不需特別定制不同的特異性探針，通用性較好，并且價(jià)格相對(duì)較低。這對(duì)科研是很有利的，因此國(guó)內(nèi)外在科研中使用比較普遍。

二、雜交探針模式(Beacon、FRET)分子信標(biāo)是一種呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，因此標(biāo)記在一端的熒光基團(tuán)與標(biāo)記在另一端的淬滅基團(tuán)緊緊靠近。熒光基團(tuán)被激發(fā)后產(chǎn)生的光子被淬滅劑淬滅，由熒光基團(tuán)產(chǎn)生的能量以紅外而不是可見(jiàn)光形式釋放出來(lái)。分子信標(biāo)的莖環(huán)結(jié)構(gòu)中，環(huán)一般為 15-30 個(gè)核苷酸長(zhǎng)，并與目標(biāo)序列互補(bǔ);莖一般 5-7 個(gè)核苷酸長(zhǎng)，并相互配對(duì)形成莖的結(jié)構(gòu)。熒光基團(tuán)標(biāo)記在探針的一端，而淬滅劑則標(biāo)記在另一端。在復(fù)性溫度下，因?yàn)槟０宀淮嬖跁r(shí)形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，當(dāng)加熱變性會(huì)互補(bǔ)配對(duì)的莖環(huán)雙鏈解開(kāi)，如果有模板存在環(huán)序列將與模板配對(duì)。與模板配對(duì)后，分子信標(biāo)將成鏈狀而非發(fā)夾狀，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分開(kāi)。當(dāng)熒光基團(tuán)被激發(fā)時(shí)，因淬滅作用被解除，發(fā)出激發(fā)光子。由于是酶切作用的存在，分子信標(biāo)也是積累熒光。

三、水解探針模式(Taqman探針)是一種寡核苷酸探針，熒光基團(tuán)連接在探針的 5’末端， 而淬滅劑則在 3’末端。當(dāng)探針與靶序列配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與 3’端的淬滅劑接近而被淬滅。在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的 5’外切酶活性將探針切斷，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離，發(fā)射熒光。一分子的產(chǎn)物生成就伴隨著一分子的熒光信號(hào)的產(chǎn)生。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來(lái)的熒光基團(tuán)不斷積累。因此 Taqman 探針檢測(cè)的是積累熒光。進(jìn)口elisa試劑盒
明黨參    規(guī)格：1g    英文名稱(chēng)：Changium smyrnioides        保存：-20℃，避光
苦楝皮    規(guī)格：2g    英文名稱(chēng)：Chinaberry bark        保存：-20℃，避光
雞冠花    規(guī)格：2g    英文名稱(chēng)：Cockscomb        保存：-20℃，避光
伸筋草    規(guī)格：1g    英文名稱(chēng)：Lycopodium clavatum        保存：-20℃，避光
扶芳藤    規(guī)格：10.0g    英文名稱(chēng)：Euonymus fortunei        保存：-20℃，避光
蘆根    規(guī)格：1g    英文名稱(chēng)：Reed rhizome        保存：-20℃，避光
花椒(青椒)    規(guī)格：2g    英文名稱(chēng)：Pepper (pepper)        保存：-20℃，避光
麥芽    規(guī)格：5g    英文名稱(chēng)：Malt        保存：-20℃，避光
卷柏(墊狀卷柏)    規(guī)格：2g    英文名稱(chēng)：Selaginella (Selaginella pulvinata)        保存：-20℃，避光
紅芪    規(guī)格：5g    英文名稱(chēng)：Radix Hedysari        保存：-20℃，避光
紅大戟    規(guī)格：3g    英文名稱(chēng)：Knoxia valerianoides        保存：-20℃，避光
肉蓯蓉    規(guī)格：1g    英文名稱(chēng)：Rou Congrong        保存：-20℃，避光
百合    規(guī)格：1g    英文名稱(chēng)：Lily        保存：-20℃，避光

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