ELISA試劑盒應用中顯色、比色問題講解

在ELISA試劑盒試驗中各種酶標儀功能都會有所不同，所以在運用中應具體閱覽說明書，再進行下一步操作。
自從20世紀60-70時代面世以來，ELISA試劑盒法得到*科研工作者的認可及推重，在歐美及中國取得很大的推行，尤其是國內生化范疇的長足發展。ELISA試劑盒有著性高、靈敏度高、特異性強等許多的長處，它在檢測抗體、抗原等方面有很好的使用，深受廣闊用戶朋友的喜歡。然而，在試驗過程中，也需求留意許多問題，特別是顯色、比色問題。
顯色是ELISA試劑盒中的zui后一步溫育反響，此刻酶催化無色的底物生成有色的產品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素。在必定時刻內，陰性孔可堅持無色，而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。恰當進步溫度有助于加快顯色進行。在定量測定中，參加底物后的反響溫度和時刻應按規則力求。定性測定的顯色可在室溫進行，時刻一般不需求嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色恰當縮短或延伸反響時刻，及時判別。
ELISA試劑盒OPD（鄰苯二胺）底物顯色一般在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，再延伸反響時刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反響應避光進行，顯色反響結束時參加停止液停止反響。OPD產品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。
ELISA試劑盒MB（四甲基聯苯胺）受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反響調查成果。但為確保試驗成果的穩定性，宜在規則的恰當時刻閱覽成果。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達，隨即逐步削弱，至2小時后即可*衰退至無色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍色維持較長時刻（12-24小時）不褪，是目視判別的良好停止劑。此外，各類酸性停止液則會使藍色轉變成黃色，此刻可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。