ELISA試劑盒使用方法及原理

ELISA試劑盒是以免疫學反響為基礎，將抗原、牽9體的特異性反響與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。因為抗原、抗體的反響在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每參加一種試劑孵育后，可經過洗刷除掉剩余的游離反響物，然后確保實驗成果的特異性與穩定性。在實踐應用中，經過不同的規劃，詳細的辦法過程可有多種。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA試劑盒間接法。 
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml，4℃。次日，棄去孔內溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗刷，下同）。
2. 加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中，置37℃孵育1小時。然后洗刷。（一起做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體：于各反響孔中ELISA試劑盒參加新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗刷。
4. 加底物液顯色：于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5. 停止反響：于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6. ELISA試劑盒成果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼調查成果：反響孔內色彩越深，陽性程度越強，陰性反響為無色或極淺，依據所呈色彩的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值，若大于規則的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。