ELISA試驗（細胞樣本）前處理

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一、勻漿介質（量）
一般采用0.05mol/LTris-HCl,pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可依據樣本及測定目標的狀況自行設定濃度,意圖是堅持樣本的等滲環境。
二、細胞樣本的前處理:
1、細胞沉積的搜集：
①懸浮細胞:關于懸浮培育的細胞，直接經過離心搜集細胞沉積，將培育液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉積。
②貼壁細胞:關于貼壁培育的細胞，用*將細胞消化下來，或用細胞刮將細胞刮下來，將培育液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉積。
我們一般主張客戶，細胞密度不要小于一百萬個/ml。
2、ELISA試劑盒細胞沉積的洗刷：
在細胞沉積中參加0.5-1ml的PBS（等滲），悄悄倒置混勻，將培育液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉積。重復上述操作重復洗刷1～2次。
3、勻漿的辦法：手藝勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,重復凍融。
①手藝勻漿：在細胞沉積中參加必定量的PBS（PBS的參加量依據所測目標的不同而有所改動，一般參加0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，用移液器將細胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置于冰水混合物中，手動勻漿3分鐘，然后取破碎好的細胞懸浮液進行測定。
②超聲破碎:
在細胞沉積中參加必定量的PBS（PBS的參加量依據所測目標的不同而有所改動，一般參加0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，在冰水浴條件下進行如下操作:
a、用超聲粉碎機進行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎，也可用國產超聲波發生儀，用400安培，5秒/次，空隙10秒重復3～5次。
b、用超聲細胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復4～5次。
③裂解液裂解
常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的效果是不同的，或者說效果力量強弱不同。
1、SDS歸于離子型去垢劑，zui厲害，根本能夠把細胞*破掉，DNA會釋放出來，裂解液變得很粘稠。
2、NP-40是很溫文的去垢劑，1%濃度的根本能夠損壞掉胞膜，而對核膜損壞的效果弱，結合特定的buffer能夠獲得胞漿蛋白。
3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間，傾向于NP40，也是常用的細胞裂解液成分之一，在維護蛋白活性方面有必定效果（SDS根本會使蛋白變性失活）。
去垢劑特點僅僅一方面，buffer、配比、濃度、提取辦法和資料處理也都是關鍵因素
因為許多裂解液都是蛋白變性劑,對酶生機的測定有必定的影響,一般不引薦用裂解液進行裂解。
④重復凍融:
ELISA試劑盒在細胞沉積中參加必定量的PBS（PBS的參加量依據所測目標的不同而有所改動，一般參加0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，放低溫冰箱中結冰，溶解，再結冰，再溶解，重復3次左右）。因為重復凍融對酶生機影響較大,一般不引薦運用。