elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

1. 血清收集保存： elisa試劑盒收集不抗凝血液3-5ml，保存4℃冰箱中，在恒溫離心機(jī)中 以4℃，3500r離心10min，收集上層血清，以200ul/管分管編號(hào)凍存-80℃冰箱中。

 2. 包被：用包被液（CBS）稀釋八種抗原至5ug/ml，以100ul/孔加入酶標(biāo)板 中，空白孔加100ul/孔3%BSA+PBS.

3.. 封閉：棄上清液，加封閉液（5%BSA+PBST）200ul/孔，37℃放置2h。

4.. 洗滌：以洗滌液洗滌5次，5min/次。 elisa試劑盒加血清樣品：將凍存血清逐級(jí)解凍至室溫，將待測(cè)血清（1:30稀釋于 1%BSA+PBST）中，以100ul/孔加入酶標(biāo)本中，37℃放置2h，陰性對(duì)照孔加100ul/孔稀釋液（1%BSA+PBST）.  

5.  洗滌：用洗滌液洗滌5次，5min/次。

6..  加酶標(biāo)二抗：人抗IgG抗體-HRP,用1%BSA+PBST 液1：10000稀釋，100ul/孔，37℃恒溫箱溫育2h。  

7. 洗滌：洗滌液洗滌5次，5min/次。  

8.  顯色：加新鮮配制的底物（TMB：A液和B液等體積混合）100ul/孔。 10.  中止反應(yīng)、比色：加50ul/孔中止液（2M H2SO4）， elisa試劑盒用酶標(biāo)儀測(cè)定吸收值（450nm），根據(jù)P/N確定陽(yáng)性值。 1 血清特異性IgE檢測(cè)  小鼠檢測(cè)完AHR后24h內(nèi)處死動(dòng)物，摘眼球取血，室溫下靜置30min，4℃4000rmp/min離心10min，小心吸取上層血清，分裝-80℃保存?zhèn)溆谩２捎瞄g4℃放 置過夜12h上。