ELISA試劑盒研究干細胞生物學的性狀

ELISA試劑盒的培養(yǎng)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于產(chǎn)前遺傳學診斷，但其生物學性狀和在體內(nèi)的起源仍沒有*明確。羊水中包含了多種異質(zhì)細胞群，這些細胞主要來源于胎兒的皮膚，胎兒的消化器官、呼吸器官和尿道，以及羊膜上皮。間充質(zhì)干細胞（ MSCs） 是干細胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層。MSCs zui初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點而日益受到人們的關(guān)注。
ELISA試劑盒均有成功分離羊水來源干細胞的報導(dǎo)，大多是利用羊水細胞貼壁的特點通過多次傳代的方法獲得干細胞。Tsai MS 等采用兩步培養(yǎng)法從孕中期羊水中成功分離出具有MSCs 特征的干細胞。隨后De Coppi 等通過免疫磁珠方法分離出c － Kit （ CD117） 陽性細胞，這些細胞在體外增殖迅速，可以形成穩(wěn)定的細胞系，他將這些細胞命名為羊水干細胞。此外通過克隆化培養(yǎng)的方法也可以從羊水中獲得干細胞。從現(xiàn)有研究情況看來，目前尚未形成統(tǒng)一的羊水干細胞培養(yǎng)體系。
ELISA試劑盒采用貼壁法分離獲得羊水細胞，培養(yǎng)細胞使用低糖DMEM 培養(yǎng)基。收集的20 例羊水標本中有17 例原代培養(yǎng)成功，并獲得可以持續(xù)傳代的穩(wěn)定細胞系。培養(yǎng)的羊水細胞體外增長迅速，倍增時間約36h。流式細胞儀檢測顯示細胞表達CD29、CD44、CD105 等間充質(zhì)干細胞表面標志，不表達造血干細胞表面標志CD45 和CD133。RT － PCR 的結(jié)果表明分離獲得的干細胞表達Oct － 4 和Nanog 基因，且不同代的細胞間均有表達。Oct － 4 和Nanog 被認為是干細胞多能分化的主要調(diào)節(jié)因子，干細胞分化后其表達立即下調(diào)。以上結(jié)果與文獻報道一致，表明羊水細胞經(jīng)體外培養(yǎng)擴增可以得到具有MSCs 性質(zhì)的干細胞。