勁馬教您如何用競爭法判斷實驗結果

  在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調節陰性對照的吸光度在 1.0-1.5 之間，此時反應zui為敏感。競爭法 ELISA 不易用自視判斷結果，因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P 和N 的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。
a. 陽性判定值法
與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，但在計算公式中引入陽性對照 A 值，現舉某種檢測抗HBc 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc 的復鈣人血漿，陽性對照中抗HBc 含量為125±100u/ml。每次試驗設2 個陽性對照和3 個陰性對照。測得A 值后，先計算陰性對照A 值的平均值(NC X )和陽性對照A 值的平均數(PCX)，兩個平均數的差(N-P)必須大于一個特定的數值(例如0.300),試驗才有效。3 個陰性對照 A 值均應小于2.000，而且應≥0.5×NCX 并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2 個陰性對照重新計算×NCX；如有2 個陰性對照A 超出以上范圍，則該次實驗無效。陽性
判定值按下式計算：
陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX
標本 A 值≤陽性判定值的反應為陽性，A＞陽性判定值的反應為陰性。
b. 抑制率法
抑制率表示標本在競爭結合中標本對陰性反應顯色的抑制程度，按下式計算：
抑制率(%)= (陰性對照A 值-標本A 值)×/陰性對照A 值一般規定抑制率≥50%為陽性，＜50%為陰性。