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    人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)elisa試劑盒

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    更新時(shí)間:2018-01-21 16:48:51瀏覽次數(shù):238次

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    人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)elisa試劑盒 實(shí)驗(yàn)原理: 用純化的MT抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的MT抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng) 過*洗滌后用底物(TMB)顯色。

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    人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)elisa試劑盒  雙抗體夾心法操作步驟:

    1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為110μgml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml4 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)   

    2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)

    3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml37 孵育0.51小時(shí),洗滌。

    4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml37 1030分鐘。

    5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

    6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。

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