培養(yǎng)基操作方法與注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基操作方法與注意事項(xiàng)加水：打開滅菌鍋蓋，向鍋內(nèi)加水到水位線。立式消毒鍋用已煮開過的水，以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存。注意水要加夠，防止滅菌過程中干鍋。 裝料、加蓋
          滅菌材料放好后，關(guān)閉滅菌器蓋，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。排氣 ：打開排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當(dāng)有大量蒸汽排出時(shí)，維持5min，使鍋內(nèi)冷空氣*排凈。

      升壓、  保壓和降壓:當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí)，即可關(guān)閉排氣閥，壓力開始上升。當(dāng)壓力上升至所需壓力時(shí)，控制電壓以維持恒溫，并開始計(jì)算滅菌時(shí)間，待時(shí)間達(dá)到要求(一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃，20min)后，停止加熱，待壓力降至接近“0”時(shí)，打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣，否則會由于瓶內(nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶內(nèi)液體沖出容器之外。
         培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應(yīng)該注意以下事項(xiàng)：

確認(rèn)工作細(xì)胞庫是否被污染，確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染，確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染，均可用細(xì)菌、真菌及支原體無菌試驗(yàn)來確認(rèn)并排除。同時(shí)要對無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)際生產(chǎn)中，可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48小時(shí)即可觀察有無污染。

其它：高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，確保滅菌和除菌效果;前者應(yīng)在投產(chǎn)前及其后的每6個月進(jìn)行驗(yàn)證，后者應(yīng)在每次除菌前、后進(jìn)行驗(yàn)證工作(至少應(yīng)在除菌后進(jìn)行一次)。