冷凍細胞活化的方法

時間：2015/8/20閱讀：272

1、冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。

2、細胞活化后，約需數日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現才會恢復正常（例如產生單株抗體或是其它蛋白質）。

3、材料：37℃恒溫水槽、新鮮培養基、無菌吸管/離心管/培養瓶、液氮或干冰容器。

4、步驟：

（1）操作人員應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。

（2）自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉。

（3）將新鮮培養基置于37℃水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。

（4）取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內。

（5）取出解凍之細胞懸浮液，緩緩加入有培養基之培養容器內（稀釋比例為1：10～1：15），混合均勻，放入CO2培養箱培養。取0.1ml解凍細胞懸浮液作存活測試。

（6）解凍后是否立即去除冷凍保護劑（例如DMSO或glycerol），依細胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10ml培養基之離心管內，離心1000rpm，5分鐘，移去上清液，加入新鮮培養基，混合均勻，放入CO2培養箱培養。

（7）若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養后隔日更換培養基。

冷凍細胞活化的方法

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