細(xì)胞株若受到細(xì)菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之污染時，會嚴(yán)重的影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。而細(xì)菌、真菌等之微生物污染時，較易自培養(yǎng)基等的外觀變化察覺。但是若受到支原體之污染時，細(xì)胞之外觀較無明顯變化，但是其污染會造成細(xì)胞之生長速率緩慢、細(xì)胞產(chǎn)生病變之型態(tài)改變等等變化。
一、造成支原體高污染率的原因?yàn)椋?/span>
1、支原體size 0.1~0.8 um，無細(xì)胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45 um）
2、支原體污染時，沒有明顯的肉眼或一般光學(xué)顯微鏡可觀察到的特征變化
3、過去缺乏簡單、快速且可靠的檢測方式
4、細(xì)胞流通間缺乏品管，造成實(shí)驗(yàn)室間的相互污染
5、研究或操作人員忽略污染問題
二、支原體污染了來源：
1、已受污染的細(xì)胞
2、操作人員的疏失
3、已受污染的培養(yǎng)基、血清
4、操作環(huán)境不良、實(shí)驗(yàn)器具不潔等
由于支原體為人體口腔中之正常菌叢，實(shí)驗(yàn)室之操作人員的污染亦可能為污染源，須十分注意。而萬一細(xì)胞已受支原體污染時，*的處理原則為將細(xì)胞高壓滅菌后丟棄，以免污染其它潔凈的細(xì)胞株。但是若是堅持要作去除支原體污染，有以下幾種方法，只不過結(jié)果會與原始的細(xì)胞特性有差異。
三、去除支原體污染：
1、抗生素處理：BM-cyclin（Roche），MRA（mycoplasma removal agent，ICN），Ciprofloxcin（Bayer），Enrofloxacin（Bayer）
2、Nucleic acid metabolites：5-bromouracil，Hoechst 33258，bromodeoxyuridine
3、Anti-sera
四、預(yù)防與控制方面可從以下各點(diǎn)加強(qiáng)注意：
1、設(shè)備方面：
(1)、使用已作支原體測試ok之細(xì)胞株
(2)、于另一隔離之區(qū)域操作未知是否有支原體污染之細(xì)胞
(3)、使用不添加抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞
2、檢測方面：定期以標(biāo)準(zhǔn)的支原體檢測方法檢測細(xì)胞、培養(yǎng)基、血清、ddH2O有否被支原體污染。
實(shí)驗(yàn)操作人員之無菌觀念與無菌操作技術(shù)之要求
五、支原體之檢測---直接培養(yǎng)法
原理：直接培養(yǎng)支原體于培養(yǎng)基中，觀察其生長及菌落生成。
特點(diǎn)：是目前zui直接與靈敏之步驟，亦是用來評估其它偵測新步驟之標(biāo)準(zhǔn)步驟。
缺點(diǎn)：培養(yǎng)時間長，須3－5星期才能判斷。有些支原體不能在培養(yǎng)基培養(yǎng)出來。需同時培養(yǎng)支原體株作為正反應(yīng)對照組，可能會造成污染。
支原體生長較慢，所以先在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)1~2周增殖后，再培養(yǎng)于agar plate上。需至少培養(yǎng)3星期后，才可斷定是否有支原體污染。所以整個測試需5個星期才知正確結(jié)果。
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