滬鼎生物|鵝胰島素(Insulin)ELISA試劑盒的原理和操作方法

檢測(cè)原理：

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中鵝胰島素(Insulin)水平。用純化的鵝胰島素(Insulin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(Insulin)，再與HRP標(biāo)記的胰島素(Insulin)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素(Insulin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中鵝胰島素(Insulin)濃度。

操作程序

1.準(zhǔn)備試劑：準(zhǔn)備樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。

2.加樣：加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

8. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10-20分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值），測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：

1.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

2.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

3.為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

4.要嚴(yán)格避免操作過(guò)程中酶標(biāo)板干燥。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活。  

5.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

6.顯色時(shí)間供參考，因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異，最佳顯色時(shí)間會(huì)有所不同。

7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

8.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

9.揭封板膜和覆蓋封板膜時(shí)應(yīng)避免用力過(guò)大導(dǎo)致液體濺出。

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