掌握技巧,輕松完成ELISA試劑盒實驗

ElISA試劑盒實驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。在ELISA試劑盒實驗操作前，許多實驗者會收集相關實驗資料，真正用到的少之又少！上海滬鼎為您整理了以下內容，讓您不再為ELISA實驗煩惱，輕松完成ELISA試劑盒實驗！

一、加樣的經驗總結

    加樣或加試劑時，請注意在吸取標本/標準品，酶結合物或底物時，*個孔與zui 后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間控制 在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。 

二、孵育的三條必知

    1.為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標 板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；

    2.洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態；

    3.同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。

三、ELISA洗滌小技巧

    洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直 接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數。 

四、反應時間的控制

    加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔 10分鐘），如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。 

五、操作說明 

    1.封板膜只做一次性使用。 

    2.標本中待測物質含量過高時先將樣本稀釋一定倍數后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數。

    3.各步加樣均使用加樣器，并經常校對其正確性，一次加樣時間控制在5分鐘內（標本數目多的時候，上海恒遠推薦使用排槍加樣）。

    4.液體標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

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