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    雞BADELISA試劑盒

    時間:2017-4-28閱讀:352
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      上海滬鼎生物科技有限公司
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    BADELISA試劑盒

     

     

     

    檢測范圍: 96T

     

    0.6pg/ml-22pg/ml

     

    使用目的:

     

    本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 BAD 含量。

     

    實驗原理

     

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中雞 BAD 水平。用純化的雞 BAD 抗體包被微孔

     

    板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入 BAD,再與 HRP 標記的 BAD 抗體結(jié)合,

     

    形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催

     

    化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 BAD 呈正相

     

    關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中雞 BAD 濃

     

    度。

     

    試劑盒組成

     

    1

    30 倍濃縮洗滌液

    20ml×1

    7

    終止液

    6ml×1

     

     

     

     

     

     

    2

    酶標試劑

    6ml×1

    8

    標準品(40pg/ml

    0.5ml×1

     

     

     

     

     

     

    3

    酶標包被板

    12 ×8

    9

    標準品稀釋液

    1.5ml×1

     

     

     

     

     

     

    4

    樣品稀釋液

    6ml×1

    10

    說明書

    1

     

     

     

     

     

     

    5

    顯色劑 A 液

    6ml×1

    11

    封板膜

    2

     

     

     

     

     

     

    6

    顯色劑 B 液

    6ml×1/

    12

    密封袋

    1

     

     

     

     

     

     

    標本要求

     

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能

     

    馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

     

    2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

     

    操作步驟

     

    • 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

     

    釋。

     

    20pg/ml

    5 號標準品

    150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

     

     

     

    10pg/ml

    4 號標準品

    150µl  5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

     

     

     

    5pg/ml

    3 號標準品

    150µl  4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

     

     

     

    2.5pg/ml

    2 號標準品

    150µl  3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

     

     

     

    1.25pg/ml

    1 號標準品

    150µl  2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

     

     

     

     

     

     

     

    • 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl

     

     

    然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

     

    量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

     

    • 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

     

    • 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

     

    • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。

     

    • 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。

     

    • 溫育:操作同 3

     

    • 洗滌:操作同 5

     

    • 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

     

    15 分鐘.

     

    • 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

     

    • 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

     

    操作程序總結(jié):

    計算

     

    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的

     

    OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

     

    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),

     

    即為樣品的實際濃度。

     

    注意事項

     

    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

     

    用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

     

    2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

     

    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

     

    控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

     

    4 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD

     

    大于標準品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計

     

    算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

     

    5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

     

    6.底物請避光保存。

     

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

     

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

     

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

     

    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

     

    保存條件及有效期

     

    1.試劑盒保存:;2-8℃。

     

    2.有效期:6 個月

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