滬鼎生物|細胞融合實驗

細胞融合(cell fusion)，細胞遺傳學名詞，是在自發或人工誘導下，兩個細胞或原生質體融合形成一個雜za種細胞。基本過程包括細胞融合形成異核體(heterokaryon)、異核體通過細胞有絲分裂進行核融合、最終形成單核的雜za種細胞。細胞融合可作為一種實驗方法被廣泛適用于單克隆抗體的制備，膜蛋白的研究。

一、細胞融合實驗所需試劑：

（1）胎牛血清或小牛血清

（2）培養基：細胞融合常用的培養液有DMEM、RPMI 1640 及無血清培養基等。DMEM有高糖（4500mg／L）及低糖（1000mg／L）之分。雜交瘤細胞在上述幾種培養基中均能良好的生長與增殖

（3）HAT及HT培養液：HAT、HT以五十分之一的比例加入培養基（ DMEM或RPMI 1640）

（４）聚乙二醇（PEG）溶液：稱取一定量的PEG，高壓蒸汽滅菌（8磅30分鐘），待其冷至50℃左右，與等體積的RPMI1640混合，即為50%的PEG溶液，封口后4℃放置備用。用于細胞融合的PEG的分子量可在1000－6000之間，目前已有商品化的50%PEG溶液可直接用于細胞融合。

二、細胞融合的方法：

1.動物細胞雜交或細胞融合

將兩個不同種的親本細胞A和B，以滅活的仙臺病毒或聚乙二醇(PEG)為融合誘導劑，使A和B兩細胞融合成為一個具兩個遺傳性不同核的異核體（如遺傳性相同的核融合在一起叫同核體）。隨后異核體經有絲分裂成為兩個具有A和B兩親本的za種融合核。AB雜za種經多次分裂，B親本的染色體會逐漸減少到一個或完wan全消失。

2.PEG促進細胞融合注意事項：

（1）事先做好兩種原生質體融合的識別標記，如色素、缺陷型、抗性標記等。

（2）原生質體或細胞密度應在105個/ml，兩種原生質體或細胞按1：1等量混合

（3）PEG誘導融合的效果，同分子量大小及濃度高低密切相關。分子量和濃度愈大，促進細胞融合的能力愈高，而其粘度及對細胞的毒性也隨之增大，故通常以選用分子4000-6000濃度30-50%的PEG進行融合為宜。

（4）PEG使細胞融合或致死劑量界限很狹小，為達到成功有效的融合，還必須嚴格掌握PEG的處理時間。一般加入PEG后，24℃培育10-20min（注意時間宜短不宜長，過長使原生質體周圍包裹一層膜形成凝集體，降低融合率），緩緩加入高鈣離子溶液15min后用沖洗液清洗，離心收集細胞或原生質體。