噬菌體滴度的操作步驟

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在宿主細胞過量的情況下，噬斑的數量隨著噬菌體的增加呈線性增加。由于這個原因，在感染以前，要將噬菌體進行稀釋，而不是將宿主細胞稀釋。以低MOI(感染重復性)鋪板，也可確保每一個噬斑僅包含一個DNA 

序列。

噬菌體滴度材料和試劑：

1. 微波爐

2. LB/IPTG/Xgal培養 板

3. lb培養基

4. 頂層瓊脂糖凝膠

噬菌體滴度操作步驟：

1. 在5~10ml LB培養基中接種單個ER2537克隆，振搖孵育直至對數生長中期(OD600~0.5)

2. 在細胞生長時，微波融化頂層瓊脂糖凝膠，分裝至無菌培養管內，每管3ml。維持在45℃備用。

3. 37℃預熱LB/IPTG/Xgal培養板，備用。

4. 以LB培養基10倍比稀釋噬菌體。

建議稀釋范圍：對擴增的噬菌體培養上清，108-1011;對未擴增的篩選洗脫液，101-104。每次稀釋都換用新的加樣槍頭，使用氣溶膠阻隔槍頭以避免交叉污染。

5. 一旦ER2537培養物長至對數生長中期，分裝至微量離心管中，每管200ml。

6. 將倍比稀釋的噬菌體上清加入含細菌培養物的微量離心管中，一支微量離心管中僅加入一種稀釋液10ml，快速渦旋，室溫孵育1-5min。

7. 轉移至含有45℃頂層瓊脂糖凝膠的管中，快速渦旋混勻，立即傾倒至預熱的LB/IPTG/Xgal平板上，輕緩搖動平板使頂層膠均勻分布。

8. 冷卻平板5min，37℃倒置培養過夜。

9. 噬斑計數以噬斑數為100左右的平皿為準，噬斑數乘以稀釋度即可獲得每10ml噬菌體的滴度-噬斑形成單位(pfu)。