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    上海滬鼎告知:免疫組化遇到的問題及其解決辦法

    時間:2013/10/30閱讀:1298
    分享:

    1、染色過強

    原因

    解決辦法

    抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體)抗體孵育時間:室溫1小時或4℃過夜
    孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃一般室溫20-28℃
    DAB顯色時間過長或DAB濃度過高顯色時間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準

    2、非特異性背景染色

    原因

    解決辦法

    操作過程中沖洗不充分每步沖洗3×5
    組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時間延長
    組織中含內源性生物素正常非免疫動物血清再封閉
    血清蛋白封閉不充分延長血清蛋白封閉時間

    3、染色弱

    原因

    解決辦法

    抗體濃度過低,孵育時間過短提高抗體濃度,孵育時間不能少于60分鐘
    試劑超過有效使用期及時更換試劑
    操作中,滴加試劑時緩沖液未瀝干,致使試劑稀釋每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥)
    室溫太低,低于15℃若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過夜)
    蛋白封閉過度封閉時間不要超過10分鐘

    4、染色陰性

    原因

    解決辦法

    操作步驟錯誤重新試驗,設立陽性對照
    組織中無抗原設立陽性對照片,以驗證實驗結果
    一抗與二抗種屬連接錯誤仔細確定一抗與二抗種屬無誤

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