小鼠肺成纖維細胞,L929細胞 返回列表頁

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ATCC細胞株的品質，小鼠肺成纖維細胞,L929細胞國內細胞的價格。對于初做細胞培養研究的工作者來說，會經常出現細胞培養問題，公司在細胞培養問題方面做了些總結，希望對你們能有所幫助。
【小鼠肺成纖維細胞,L929細胞培養液pH值變化太快】CO2張力不對。培養瓶蓋擰得太緊。NaHCO3緩沖系統緩沖力不足。培養液中鹽濃度不正確。細菌、酵母或真菌污染。
按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。（2）改用不依賴CO2培養液，松開瓶蓋1/4圈，加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度，在CO2培養環境中改用基于Earle’s鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hank’s鹽配制的培養液，丟棄培養物或用抗生素除菌。
【培養液出現沉淀，但pH值不變】用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養基成分沉淀下來。冰凍保存培養液，用去離子水反復沖洗玻璃器皿，然后除菌，將培養液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養液。
【培養液出現沉淀，同時pH 發生變化】細菌或真菌污染，丟棄培養物或用抗生素除菌。
【培養細胞不貼壁】*消化過度；支原體污染；培養液中無貼壁因子，縮短*消化時間或降低*濃度，分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。
【懸浮細胞成簇】培養液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過度消化使得細胞裂解釋放DNA，用無鈣鎂*洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液，分離培養物，檢測支原體。如發現支原體污染，丟棄培養物，用DNase I處理細胞。
【原代細胞培養物污染】原代培養組織在進入培養前已污染，培養前用含高濃度抗生素的*反復沖洗組織。
【培養細胞死亡】培養箱內無CO2。培養箱內溫度波動太大。細胞凍存或復蘇過程中損傷。培養液滲透壓不正確。培養液種有毒代謝產物堆積；檢測培養箱內CO2檢查培養箱內溫度；取新的保存細胞種；檢測培養液滲透壓。注意：大多數哺乳動物細胞能耐受滲透壓為260–350mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養液滲透壓，換入新鮮培養液。
【培養細胞生長減慢】由于更換不同培養液或血清。培養液中一些細胞生長必需成分如*或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。培養物中有少量細菌或真菌污染。試劑保存不當。
比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。
1）增加起始培養細胞濃度。
2）讓細胞逐漸適應新培養液。
3）換入新鮮配制培養液。
4）補加*或生長因子。
5）用無抗生素培養液培養，如發現污染，丟棄培養物。或用抗生素除菌。
6）血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養液需在2–8℃避光保存。含血清*培養液在2–8℃7）保存，并在2周內用完。
8）接種細胞起始濃度太低，細胞已老化，支原體污染。
9）增加接種細胞起始濃度。
10）換用新的保種細胞。
11）分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。
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