ELISA試劑盒基礎(chǔ)知識培訓(xùn)

大家在做ELISA試劑盒實驗的過程中，難免會遇到各種不同的問題，比如標(biāo)準(zhǔn)曲線不好，試劑盒的回收率，假陰性，假陽性，實驗的重復(fù)性不好等等。現(xiàn)在專業(yè)人士就來一一解答用戶們在實驗過程中遇到的各種疑問！
曲線問題： 
1.OD值不正常
試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃
溫度控制不好，控制正確溫度
孵育時間不準(zhǔn)確，控制孵育時間
洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干
陽光直射，對著風(fēng)直接吹，避風(fēng)避
酶標(biāo)儀的波長錯誤，酶標(biāo)儀的波長450nm
抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體
水質(zhì)問題，用娃哈哈礦泉水代替
2.白   板
洗滌液配制錯誤，正確的配制洗滌液
少加液體（錯加液體），正確的步驟加液體
3.無 梯 度
標(biāo)準(zhǔn)品也污染，換標(biāo)準(zhǔn)品點板
OD值不正常，控制溫度時間在做一次
人為點板，不要點板
4.線 性 不 好
OD值不正常，控制溫度時間在做一次
回收率
1.空白管陽性高
樣本本身就是陽性樣本，換陰性樣本做回收率
空白管在實驗中被污染，實驗中防止交叉污染
水質(zhì)原因用，娃哈哈礦泉水代替
2.偏  高
添加量不準(zhǔn)確，的添加量
添加濃度不適合，添加合適的濃度
取液吹干量多，準(zhǔn)確的取液吹干
取到其它相層液體，取需用相吹干
復(fù)溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復(fù)溶液
3.偏  低
添加量不準(zhǔn)確，的添加量
添加濃度不適合，添加合適的濃度
取液吹干量少，準(zhǔn)確的取液吹干
復(fù)溶液稀釋錯誤或加入量多，正確的稀釋復(fù)溶液
假陰、陽性
1，水質(zhì)原因：點復(fù)溶液驗證，用娃哈哈礦泉水代替
2，實驗操作原因
吸取到其它相吹干，準(zhǔn)確的取液吹干
離心不*，延長離心時間
樣本的污染，更換樣本
乳化未處理*，溫浴（70℃）處理乳化現(xiàn)象
3，儀器試劑原因
離心管未清洗干凈，正確的洗滌器具
有機(jī)溶劑的影響，做試劑空白看影響結(jié)果
4，衍生化試劑原因（長時間衍生化試劑變質(zhì)）,更換衍生化試劑
5，與曲線好壞相關(guān),，保證曲線的正常。