ELISA試劑盒檢測沙眼衣原體抗體的方法

沙眼衣原體有3個生物學變種，其中2個與人類疾病有關，引起沙眼及包涵體結膜炎。沙眼是世界范圍流行的眼病，是致盲的重要原因。此外，沙眼衣原體、人型支原體、解脲脲原體是引起人類泌尿生殖系統感染的重要病原體，尤以沙眼衣原體更重要。常用檢查方法有ELISA試劑盒和生物芯片法檢測沙眼衣原體抗體。
方法學原理：在已包被沙眼衣原體抗原的微孔板孑L內，加入待測血清和HRP-抗人Ig，再加入酶底物顯色。根據顯色強度可判定沙眼衣原體抗體的有無及水平。
    [試劑]
    1．預包被微孔板
    2．洗滌液
    3．HRP-抗人IgG
    4．陰性對照、陽性對照
    5．底物液
    6．終止液
    [儀器]  酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。
    [ELISA試劑盒檢測步驟]
    1．從試劑盒中取出已包被沙眼衣原體抗原的微孔板和所有試劑，預溫至室溫。
    2．將待檢血清、校準血清、陰性和陽性質控血清用稀釋液作1：20稀釋。分別加至相應的微孔內，每孔100u1。空白孔加稀釋劑100ul。
    3．室溫環境中溫育20min后用洗滌液洗3次，每次洗滌量250ul。
    4．各孔分別加HRP-抗人IgGl00~1，室溫環境中溫育20min，同上法洗滌3次。
    5．各孔加底物溶液100rtl，室溫環境中溫育10min顯色，每孔加終止液100gl終止反應。
    6．在酶聯免疫測定儀上測定450nm波長的吸光度。
   [結果判斷]
    1．將吸光度用下列公式換算成ISR值：
ISR＝樣品的吸光度÷（校準物的平均吸光度×校正因子）
（校正因子在校準血清的標簽上）
    2．待測血清ISR值≤0．9為陰性。
    3．待測血清ISR值為0．91一1. 09為可疑陽性，應重新檢測或隨診。
    4．待測血清ISR值≥1．10為陽性。
    [注意事項]
    1．每次試驗均須設置陽性與陰性質控血清和校準血清測定孔。
    2．用450nm波長，試劑空白的吸光度必須<0．15；陰性質控血清的吸光度必須<0．25；陽性質控血清的吸光度必須≥0．50；校準血清的吸光度必須≥0．25。
[ELISA試劑盒正常參考值]  沙眼衣原體抗體陰性。