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液相色譜儀的梯度洗脫和氣相色譜儀中的程序升溫類似，給色譜分離帶來很大的方便，已成為液相色譜儀*的部分。
所謂梯度洗脫，就是有兩種或兩種以上不同極性的溶劑，在分離過程中按照一定程序連續地改變，以改變流動相的配比和極性。通常用的流動相一般為二元溶劑。在梯度運行期間，強溶劑B（如反相HPLC中的甲醇）的濃度增大。一般以這種溶劑中強溶劑B的體積比（%B）表示。
現在有許多實驗室在使用液相色譜儀的梯度洗脫技術，這是因為梯度洗脫可克服等度洗脫的一些弱點：
1 避免早流出峰分離度不好的缺點；
2 避免晚流出峰峰變快峰高降低的缺點；
3 避免混合物容量因子范圍寬時分析時間長的缺點；
4 避免保留時間長的組分污染色譜柱的缺點。
所以梯度洗脫液相色譜儀適合于以下幾種情況的待測樣品分析：
1 具有較寬容量因子范圍的樣品.
2 大分子樣品，相對分子質量大于1000的，尤其是生物樣品。
3 樣品中含有高保留時間的干擾成分，在一次分析中如不把它洗脫出去，就會污染色譜柱，并影響下一次分析。
4 即使在液相色譜儀使用等度時也可以使用梯度洗脫選擇流動相的比例。
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