提高IHC方法敏感性的輔助手段

1）蛋白酶消化蛋白酶消化可以去除覆蓋于抗原決定簇表面的雜蛋白，更為重要的是因甲醛固定而引起的交聯(lián)被打開，有利于抗原—抗體的結(jié)合，提高陽性檢測率。

（2）抗原修復(fù)選擇適宜的修復(fù)液（pH值、離子濃度）、修復(fù)方式、溫度。

（3）抗原修復(fù)與酶消化結(jié)合使用。

（4）高敏感顯色方法的選擇DAB是IHC染色中HRP常用的供氫體，如在其顯色液中加入一定量的金屬離子，例如Ni、Cu、Ag等，不但可提高其敏感性，還可以改變其終產(chǎn)物的顏色。TMB即四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽，是一種敏感性較高的顯色基團(tuán)。NBT/BCIP為堿性磷酸常用的顯色劑，其敏感性要遠(yuǎn)高于HRP的DNA顯色劑。另外，開展膜上雜交或蛋白檢測可用高敏感的化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)。