使用重組肽庫為受體識別新配體

包含有億萬個隨機肽段序列的大容量數據庫對多種蛋白靶分子是一個豐富的資源庫，例如包含細胞因子和生長因子配體、蛋白酶抑制劑和離子門通道。大多數情況下，肽段的配體通過將固定的純化后的蛋白在噬菌體展示文庫里掃描的方法純化。近有報道表明，甚至更復雜的靶分子，比如完整的細胞和組織也能夠通過特異性結合細胞表面抗原來鑒定肽段。通過線性和環形肽段文庫可以鑒定出10—20個氨基酸的高親和性配體。大多數這樣的序列和已知一些特定靶蛋白的配體沒有相似性。事實上這項技術和其他聯合方法都是基于相互作用的本質的。

我們將描述一種多步鑒定受體的高親和性配體的方法。*步需要建立一個包含隨機肽段文庫的絲狀噬菌體pⅧ展示載體。然后文庫再在允許獨立相對較弱結合序列的條件下進行掃描， 目的是為了篩選出一個或多個特異性結合靶蛋白的配體家族。然后可以通過親和性選擇展示系統，建立包含有很多先導肽段序列的次級文庫。這時可以采取一系列寡核苷酸突變策略，在改變核苷酸的同時固定某些特定的核苷酸基團，或者在各個末端加上任意殘基作為受體添加接觸點的探針。然后文庫被運用于擴充展示高親和肽段克隆的選擇方法，后將獲得的克隆通過一種對親和力敏感的酶聯免疫吸收檢驗，即完成這個過程。

http:///