抗乙酰*受體（acetylcholinereceptor，AchR） 抗體檢測

重癥肌無力（myastheniagravis，MG）是一種神經肌肉系統疾病，由于病人的自身抗體與神經肌肉連接處的乙酰*受體（acetylcholinereceptor，AchR）結合，對此受體起封閉和破壞作用。由于此種受體的大量破壞，從而發生神經的沖動不能傳導至肌肉，其主要臨床表現為肢體軟弱無力。抗AchR抗體主要為IgC型（以IgCl、IGC．2亞類為主，IgC．亞類次之），可檢測到IgM型。不同類型的MG病人血清抗AchR抗體具有不同性質。抗AchR抗體的檢測方法先使用的是放射免疫，以后，為避免使用核素，各種酶聯免疫法應運而生。這些檢測方法中都要應用。·銀環蛇毒素（a-bungarotoxin，a-BT）：a-BT是從銀環蛇毒液中提取的一種肽類，分子量為8kD左右。它能高度選擇性與AchR結合，這種結合幾乎是不可逆的。如用ELISA法，可用ct-BT預先包被固相載體，然后利用其特異性吸附加入的AchR，再測定待測血清中的抗AchR抗體。ELISA法簡便易行，便于推廣，故將其介紹如下。

1．試劑 ①a-BT：可購得商品；②AchR：取人骨骼肌200—250g，用生理鹽水洗凈，加入濕重2倍量的緩沖液，高速勻漿90s后20 000Xg離心30rain。除去上清（血液、脂質），加入濕重2倍量的緩沖液，再次勻漿。向其中加入TritonX-100至終濃度為2％，4℃攪拌過夜。100 000Xg離心1h，上清即為AchR。也可購買商品；③HRP標記的抗人IgC。

2．操作步驟
（1）用包被液將ct-BT稀釋為適濃度（用方陣滴定法選出），包被聚苯乙烯反應板，每孔200pL（含ct-BT約為2．5pmol／L）。4℃過夜后用洗滌液洗3次，每次3min（以下同）。
（2）將AchR用稀釋液適當稀釋，加至包被孔中，每孔200btL（0．2pm01），37~C1h。同上洗滌。
（3）力[1X適當稀釋的待測血清，每孔200gL，37℃30min。同上洗滌。
（4）加入適工作濃度的HRP標記抗人IgC，37℃30rain。同上洗滌。
（5）加入底物溶液（OPD-H202）每孔200L，37℃ 30min，mol／LH2S04終止反應。

3．結果觀察 于酶標儀上測492nm吸光度。以陽性混合血清作為標準血清，制備標準曲線。待測血清中抗AchR抗體含量，可根據吸光度從標準曲線上換算。

4．正常范圍與臨床意義 須對正常人和相關疾病患者進行調查，確定正常上限。抗AchR抗體是MG的主要自身抗體，總的陽性率在63％、90％之間。抗體滴度基本上與病情嚴重程度相關。有效治療后該抗體水平下降，臨床惡化時又可見該抗體滴度上升。抗AchR抗體的陽性檢出率除與前述的抗原有關外，還與肌無力的臨床類型、人種和是否伴發其他自身免疫病等因素有關。我國人口中的MG總抗體水平較低，但在降低陽性標準后，其陽性率與歐美國家相近。然而，有部分MG患者血清中測不到抗AchR抗體。因此，抗AchR抗體陰性不能否定MG的診斷。應當指出，抗AchR抗體陽性還可見于膽汁性肝硬化、癲癇、強直性肌營養不良、DOWN病等。