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    免疫PCR體系的組成分析

    時(shí)間:2014-3-20閱讀:470
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    免疫PCR體系的組成
    免疫PCR體系由待檢抗原,特異性抗體,連接分子,DNA和PCR擴(kuò)增系統(tǒng)。以下為上海勁馬為大家提供的免疫PCR體系有哪些重要組成。咨詢。
    1.待檢抗原  被檢測(cè)的樣品可以是抗原,或者是作為抗原的某種抗體。待檢的抗原可以直接吸附于固相(包被抗原),這一過程與ELISA試驗(yàn)是相同的。
    2.特異抗體  免疫PCR中的特異性是對(duì)應(yīng)于待測(cè)抗原,與ELISA一樣,抗體的特異性和親和力將影響免疫PCR的特異性和敏感性。一般均選用單克隆抗體,這個(gè)抗體常采用*標(biāo)記,通過親和或葉綠素再結(jié)合DNA。
    3.連接分子  連接分子是連接特異抗體與DNA之間的分子。Sano等用鏈親和素/蛋白A(striptavidin-protein A)基因工程融合體作為連接分子來連接*標(biāo)記的DNA與抗體,此種融合蛋白的鏈親和素部分可識(shí)別DNA上的*,蛋白部分可識(shí)別抗體的Fc段。
    4.DNA和PCR系統(tǒng)   免疫PCR中的DNA是一指示分子,用DNA聚合酶將結(jié)合于固相上的DNA特異放大,由此定量檢測(cè)抗原。免疫PCR的敏感性多于ELISA主要是應(yīng)用了PCR強(qiáng)大的擴(kuò)增能力。免疫PCR中的DNA分子可以選擇任何DNA,但要保證DNA的純度,且有較好的均質(zhì)性,盡可能不選用受檢樣品中可能存在的DNA。一般可選用質(zhì)粒DNA或PCR產(chǎn)物等。DNA的*化是用*標(biāo)記的dATP或dUTP通過聚合酶標(biāo)記在DNA分子上,一般是1個(gè)分子DNA標(biāo)記2個(gè)*,標(biāo)記率可達(dá)。免疫PCR的PCR擴(kuò)增系統(tǒng)與一般PCR一樣,主要包括引物、緩沖液和耐熱DNA聚合酶。

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