人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）ELISA試劑盒 返回列表頁(yè)

人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)ELISA試劑盒組成：

人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)ELISA試劑盒自備材料：

1. 酶標(biāo)儀。 

2. 自動(dòng)或者手工洗板機(jī)。 

3. 恒溫箱。 

4. 可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器。 

5. 干凈的試管和Eppendof管。

人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)ELISA試劑盒操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照?qǐng)D表在小試管中進(jìn)行稀 釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、      待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

  重復(fù) 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

    15 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制注意事項(xiàng)：

1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來(lái)的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)從談起。

2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度zui陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，ELISA試劑盒這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。

4、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對(duì)低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。

5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。

6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來(lái)說(shuō)，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對(duì)于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999.

人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線選擇什么擬合方程：

1.在S曲線的低濃度部門(mén)可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部門(mén)可以用直線方程，中間部門(mén)可用對(duì)數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù)。免疫檢測(cè)時(shí)尺度點(diǎn)（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度假如和相應(yīng)的吸光度（OD）值假如能夠呈現(xiàn)直線關(guān)系當(dāng)然是的了，這時(shí)可以通過(guò)EXELL等利便的獲得擬合曲線，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。 

2.關(guān)于尺度曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對(duì)數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反應(yīng)中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部門(mén)，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中間一段，而Logistic曲線則對(duì)曲線的全部都有較好的合用性。

3.在一個(gè)長(zhǎng)的區(qū)間內(nèi)，Logistic應(yīng)該都能擬合得較為理想。假如用來(lái)定量，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的，而兩真?zhèn)€平坦部門(mén)計(jì)算誤差會(huì)大，有時(shí)甚至?xí)艽蟆Ｓ糜诿庖邫z測(cè)的所謂“尺度曲線"實(shí)在稱為擬合曲線比較合適。目前上zui流行的免疫檢測(cè)擬合方式是“四參數(shù)邏輯擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較精確的反映濃度和吸光度的曲線關(guān)系，從而進(jìn)一步比較準(zhǔn)確的獲得樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度值。但我們做免疫檢測(cè)很少有時(shí)候能夠有這么理想的情況，標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值往往是"S"型的曲線關(guān)系，這時(shí)就不能用直線擬合的方式了，而對(duì)擬合方法進(jìn)行選擇就是必要的了。樞紐在于你的尺度曲線做到了S形的哪一部門(mén)，你想檢測(cè)的樣品濃度在曲線的哪一部門(mén)。當(dāng)然，假如用于定量，仍是在中間一段較好。但建模型是一回事，ELISA試劑盒而用它來(lái)定量是另一回事。這些方法固然沒(méi)有一種方法可以通用，但也都可以用。但并不是說(shuō)它就是*的。事實(shí)上不僅是ELISA，其它良多生物學(xué)反應(yīng)都是S形曲線，也都可以用Logistic曲線擬合。

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