小鼠水通道蛋白1（AQP-1）ELISA試劑盒附詳細(xì)說明書，提供技術(shù)咨詢

小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒是一種利用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠白介素6含量的科研試劑盒。上海百蕊生物科技有限公司專業(yè)銷售 elisa檢測試劑盒，質(zhì)量可靠，價(jià)格低廉。我們所銷售的大鼠白介素6Elisa試劑盒，具有度高于市場同類產(chǎn)品，性價(jià)比在市場上具有很強(qiáng)的優(yōu)勢，如果產(chǎn)品有質(zhì)量問題，免費(fèi)包退換。歡迎廣大師生朋友訂購， ： 或者 14721017287，:

 用于ELISA測定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清（漿）其次為唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物為傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、特種蛋白時(shí)，在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面：1）要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，故在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA 測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色［1］。2）樣本的采集及血清分離中要注意避免細(xì)菌污染。細(xì)菌生長分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；此外一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。3）血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可在2～8℃下保存1周。如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存應(yīng)在- 70℃以下。4）冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。5）標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要注意收集時(shí)間對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。

實(shí)驗(yàn)時(shí)通常將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測定中試劑準(zhǔn)備zui關(guān)鍵的是，在實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定。以使試劑盒在使用前與室溫平衡。其目的是在后面的溫育反應(yīng)步驟中，使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí)，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制。

    在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意避免以下幾點(diǎn)：加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要。滴加太快易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附，從而引起非特異顯色。故有時(shí)一份標(biāo)本用相同的試劑盒兩次測定結(jié)果不同，往往是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。

       溫育是ELISA測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟。ELISA作為一種固相免疫測定，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間，且溫育所需時(shí)間與溫度成負(fù)相關(guān)性。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。 目前ELISA商品試劑盒，國產(chǎn)反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃ 30分鐘～1小時(shí)，進(jìn)口試劑盒為37℃ 1～2小時(shí)才能較*的結(jié)合。溫育實(shí)際測定操作中要注意以下幾點(diǎn)：1）要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間。在臨床實(shí)驗(yàn)室中，通有將微孔板一放入溫箱即開始計(jì)時(shí)，造成實(shí)際測定中溫育時(shí)間不夠，弱陽性樣本測不出來 。南方冬季室內(nèi)溫度較低應(yīng)特別注意，此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時(shí)間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性［3］。為保證37℃下足夠的溫育時(shí)間，可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)（不同室溫下）微孔板從室溫拿至溫箱所需時(shí)間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃，用一小溫度計(jì)放置板孔反應(yīng)溶液中測量觀察即可。2）溫育溫度的選擇。在有的ELISA試劑盒的說明書中，指出溫育溫度可有兩種。從免疫測定的抗原抗體反應(yīng)的本質(zhì)來看，在較低的溫度下反應(yīng)較長的時(shí)間zui為*。建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應(yīng)時(shí)間的條件。3）“邊緣效應(yīng)”的排除。“邊緣效應(yīng)”指外周孔顯色較中心孔深，原因?yàn)?6孔板周孔與中心孔表面熱力學(xué)梯度不同。使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí)，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可排除“邊緣效應(yīng)”，且可提高測定重復(fù)性。
    總而言之，盡量采用水浴，溫育中讓微孔板浮于水面上，或?qū)⒔杆纳巢挤湃胍淮箫埡兄谐梢粷窈校庞跍叵渲小＿@樣因板條孔底部直接與37℃水或濕布的接觸，水浴箱或濕盒內(nèi)的高溫度使反應(yīng)溶液的溫度迅速與溫室平衡。