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    PACBIO RS測序儀簡單介紹

    時間:2011-10-29閱讀:1508
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    PACBIO RS測序儀作為第3代測序儀終于誕生了,與之前測序儀相比,它究竟好在哪里,有哪些優點呢?

    與其他單分子測序儀類似,PacBio RS在標記的核苷酸摻入到單鏈DNA分子時讀取那一瞬的熒光。然而,這項技術的與眾不同之處在于錨定的DNA聚合酶實時處理核苷酸結合。大部分第二代測序技術需要洗掉聚合酶周圍的核苷酸,簡化檢測,但減慢了整個過程。PacBio RS則避免了多次洗滌的需要,將單個DNA聚合酶錨定在反應孔的底部。

    標記的核苷酸涌入反應孔,自由擴散。當聚合酶檢測到正確的核苷酸時,便將其摻入新生鏈中,這個過程需要幾毫秒,而單純的擴散只需要幾微秒。這種時間差使摻入的核苷酸產生了很高的信號強度,類似于脈沖信號。反應孔的底部有一個非常小的孔,小到比探測激光的單個波長還要短。激光波長為600 nm,在進入反應孔后迅速衰減,因此,只有底部30 nm被照亮,讓孔外的標記核苷酸處于黑暗之中,從而大大降低了背景信號。

     

    鑒于PacBio RS實現了DNA聚合過程的實時檢測,所以研究人員能在短短的幾分鐘內對長片段DNA進行測序。從樣本制備到測序,所需的時間還不到一天。典型的測序運行時間低至30分鐘。這在之前是無法想象的。此外,PacBio RS目前的讀長超過1kb,比第二代測序要長得多。試劑消耗和樣本制備也極少,不需要常規的PCR擴增,失誤也大大減少。

    總的說來,測序速度、讀長、靈活性讓PacBio RS從第三代測序儀中脫穎而出。




     

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