大鼠補體蛋白3（C3） ELISA試劑盒的簡介和使用說明

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       補體并非單一分子，而是存在于血清、組織液和細胞膜表面的的一組不耐熱的經活化后具有酶活性的蛋白質，包括30余種可溶性蛋白和膜結合蛋白，故被稱為補體系統。補體廣泛參與機體微生物防御反應以及免疫調節，也可介導免疫病理的損傷性反應，是體內具有重要生物學作用的效應系統和效應放大系統。

ELISA試劑盒的簡介：

補體（complement,C）是由30余種廣泛存在于血清、組織液和細胞膜表面的蛋白質組成的，具有精密調控機制的蛋白質反應系統，其活化過程表現為一系列*蛋白酶的級聯酶解反應。

    補體系統參與機體的特異性和非特異性免疫機制，表現為抗微生物防御反應，免疫調節及介導免疫病理的損傷性反應，是體內一個重要的效應系統和效應放大系統，而補體C3是補體系統中含量zui高的成分。

補體系統（complement system）一組存在于人和脊椎動物正常新鮮血清中的非特異性球蛋白。它與酶活性有關。 19世紀末，在研究免疫溶菌和免疫溶血反應中。認為這種球蛋白是對抗體的溶細胞有輔助作用的物質，因而得名補體。補體由9種成分組成，分別命名為 C1、C2、C3、…、C9。C1又有 3個亞單位即C1q、 C1r和C1s。除C1q外，其他成分大多是以酶的前體形式存在于血清中，需經過抗原-抗體復合物或其他因子激活后，才能發揮生物學活性作用，這叫做補體的經典激活途徑。近20年來，又發現了替代激活途徑和其他的一些激活途徑，同時也發現血清中的許多其他因子參與這些途徑的激活過程，此外，還發現有許多滅活補體的因子。因此，將與補體活性及其調節有關的因子統稱為補體系統。補體系統是由20多種不同的血清蛋白組成的多成分系統，至少有兩種以上的不同激活途徑。

  由于蛋白質化學和免疫化學技術的進步，自血液中分離、純化補體成分成功，已證明補體是單一成分的論點是不正確的，它是由三組球蛋白大分子組成。即*組分是由9種補體成分組成，分別命名為C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9。其中C1是由三個亞單位組成，命名為Clq、Clr、Cls，因此*組分是由11種球蛋白大分子組成。發現一些新的血清因子參與補體活化，但它們不是經過抗原抗體復合物的活化途徑。而是通過旁路活化途徑。這此些因子包括B因子、D因P因子，它們構成補體的第二組分。其后又發現多種參與控制補體活化的抑制因子或滅活因子，如CI抑制物、I因子、H因子、C4結合蛋白、過敏毒素滅活因子等。這些因子可控制補體分子的活化，對維持補體在體內的平衡起調節作用，它們構成了補體的第三組分。

使用說明：

• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液50μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
• 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。