上海百蕊大鼠ACTH檢測(cè)試劑盒對(duì)促腎上腺皮質(zhì)激素的動(dòng)態(tài)觀察

利用上海百蕊生物的大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)檢測(cè)試劑盒對(duì)大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的動(dòng)態(tài)觀察

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RheumatoidArthritis，RA)是一種慢性自身免疫性疾病，其基本病理改變是滑膜炎，急性期滑膜腫脹、滲出，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，慢性期滑膜增生肥厚，軟骨吸收，骨質(zhì)破壞和骨纖維化。許多研究已經(jīng)表明淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、滑膜細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞介導(dǎo)的異常細(xì)胞免疫、體液免疫而導(dǎo)致的關(guān)節(jié)局部和全身的免疫功能紊亂，在RA的病理中起著重要作用。RA的病因還不*清楚。近年來(lái)，隨著神經(jīng)內(nèi)分泌免疫學(xué)的發(fā)展，下丘腦一垂體一腎上腺皮質(zhì)軸(Hypothalamic-pituitary-adrenalaxis，HPAA)在RA發(fā)病中所起的作用越來(lái)越受到人們的重視。由*弗氏佐劑所誘導(dǎo)的佐劑關(guān)節(jié)炎(AdjuvantArthritis，AA)大鼠模型被認(rèn)為具有與RA相似的關(guān)節(jié)炎變化，本試驗(yàn)即以其為基礎(chǔ)，動(dòng)態(tài)觀察促腎上腺皮質(zhì)激素(AdrenocorticotropicHormone，ACTH)及白細(xì)胞介素6(Interleukin-6，IL-6)在佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清及滑膜中的表達(dá)，探討神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)在RA發(fā)病中的可能作用。

方法：⒈選用45只雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分成9組，每組5只，分別命名為Ⅰ-Ⅸ，其中Ⅰ組為正常對(duì)照組，Ⅱ-Ⅶ組分別為AA模型建立后不同時(shí)間的實(shí)驗(yàn)組，Ⅱ組為7d，Ⅲ組為14d，Ⅳ組為21d，Ⅴ組為28d，Ⅵ組為35d，Ⅶ組為42d，Ⅷ組為49d，Ⅸ組為56d，其中實(shí)驗(yàn)組每只大鼠給予尾根部皮內(nèi)注射*弗氏佐劑(CFA)0.2ml制作AA模型。⒉于注射后連續(xù)觀察大鼠的一般情況及關(guān)節(jié)炎癥表現(xiàn)，并計(jì)算關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)；各組于規(guī)定時(shí)間下腔靜脈采血，離心備用，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)定血清中IL-6水平，應(yīng)用IMMULITE分析儀測(cè)定血清中ACTH的水平。⒊分別于規(guī)定時(shí)間采血處死后取大鼠雙膝關(guān)節(jié)滑膜組織，10％*固定，石蠟包埋，行蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察關(guān)節(jié)滑膜襯里層細(xì)胞(LLC)增生，襯里下層炎細(xì)胞浸潤(rùn)以及血管翳形成等病理變化。⒋對(duì)上述滑膜組織進(jìn)行ACTHSP以及IL-6SP免疫組織化學(xué)染色，并采用真彩色病理圖像分析系統(tǒng)4.0對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行定量分析。⒌應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

結(jié)果：⒈AA大鼠隨病程進(jìn)展，AI先升高后降低，滑膜襯里細(xì)胞層數(shù)則逐漸增加。⒉AA大鼠血清ACTH水平第7天即有上升，但正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，隨AI逐漸增加，血清ACTH水平逐漸升高，至28天AI達(dá)至高峰時(shí)，ACTH水平達(dá)到zui高，與正常對(duì)照組相比有顯著性差異(p＜0.05)，而后隨AI逐漸下降，ACTH水平亦有所下降，觀察至56天時(shí)基本恢復(fù)至正常水平，與正常組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；血清IL-6的水平變化與ACTH相似，但在早期即升高明顯，第7天時(shí)與正常對(duì)照組相比有顯著性差異(p＜0.05)。⒊AA大鼠血清ACTH水平與AI呈正相關(guān)(r=0.716，p＜0.01)；血清IL-6水平與AI呈正相關(guān)(r=0.584，p＜0.01)；血清ACTH與IL-6水平呈正相關(guān)(r=0.746，p＜0.01)。⒋AA大鼠LLC隨病程增加而增加，與AI、血清ACTH、IL-6水平均無(wú)相關(guān)。⒌A(chǔ)A大鼠滑膜組織ACTH的表達(dá)隨病程進(jìn)展亦呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，與AI呈正相關(guān)(r=0.725，p＜0.01)，滑膜IL-6表達(dá)與AI呈正相關(guān)(r=0.716，p＜0.01)，滑膜ACTH與滑膜IL-6表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.931，p＜0.01)。⒍血清中ACTH的水平與滑膜中ACTH的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.846，p＜0.01)；血清中IL-6的水平與滑膜中IL-6的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.786，p＜0.01)。 結(jié)論：⒈血清IL-6水平及滑膜IL-6表達(dá)均與AI呈正相關(guān)，且在早期無(wú)明顯關(guān)節(jié)炎癥狀時(shí)即有明顯升高，提示IL-6可作為RA的早期活動(dòng)性指標(biāo)之一。⒉血清IL-6水平與滑膜IL-6的表達(dá)呈正相關(guān)，且滑膜中IL-6升高較血清中為著，說(shuō)明IL-6主要在局部發(fā)揮作用，應(yīng)用抗IL-6的生物制劑可能對(duì)于延緩局部關(guān)節(jié)破壞有一定作用。⒊血清ACTH水平與滑膜ACTH的表達(dá)也均與AI呈正相關(guān)，提示無(wú)論是在外周血還是局部關(guān)節(jié)，ACTH均起到了一定的抗炎作用。在外周血，細(xì)胞因子刺激HPAA釋放ACTH發(fā)揮抗炎作用，在局部關(guān)節(jié)則可能是滑膜細(xì)胞、單核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞自分泌或旁分泌irACTH對(duì)抗細(xì)胞因子的致炎作用。⒋血清ACTH水平與滑膜中ACTH的表達(dá)呈正相關(guān)，但在后期血清中ACTH降至正常時(shí)，滑膜及單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中仍有明顯表達(dá)，提示HPAA對(duì)局部關(guān)節(jié)的irACTH無(wú)明顯影響。⒌滑膜襯里細(xì)胞層數(shù)與ACTH、IL-6水平均無(wú)關(guān)，提示根據(jù)后兩者可判斷疾病的活動(dòng)性，但不能作為關(guān)節(jié)破壞嚴(yán)重程度的判斷。⒍IL-6子可作用于HPAA，從而調(diào)控ACTH分泌。本試驗(yàn)表明，關(guān)節(jié)炎活動(dòng)期，無(wú)論是在外周血還是在滑膜，ACTH均隨IL-6水平的變化而改變，提示ACTH與IL-6的變化密切相關(guān)。