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    檢測AIP酶的實驗中,對組織和培養(yǎng)細胞的前處理

    時間:2015-8-5閱讀:837
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    組織的前處理:(組織勻漿上清液的制備參考實驗方法學)

    準確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=19的比例,加入9倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機械勻漿,2500/分,離心十分鐘,取上清液(即10%的勻漿上清液),再用生理鹽水10倍稀釋成1%,同時用考馬斯亮藍試劑測定蛋白組織(本公司有售)。如果預試結果太高,再將1%的組織勻漿稀釋成不同濃度再進行預試后再決定取樣濃度。

    培養(yǎng)細胞的前處理:將培養(yǎng)細胞消化,離心,棄上清,留下層細胞,每管加0.2—0.3ml生理鹽水或勻漿介質制備成107/cm3細胞懸液,即107/ml,再進行破碎。破碎細胞的方法有三種:A.用勻漿器勻漿 B.用超聲粉碎器粉碎 C.反復凍溶3次(C方法有時會影響酶活力)。制備好的細胞懸液不需要離心,同時用考馬斯亮藍試劑測定組織蛋白。再將細胞勻漿液稀釋成不同濃度進行預試,根據(jù)預試結果決定取樣濃度

     在測試加樣前要搖勻后取樣

          不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻漿或稀釋樣本。

     預試結果將吸光度值(測定管吸光度值-對照管吸光度值)控制在0.2左右為宜。

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