上海百蕊為大家提供：WB實驗的詳細(xì)操作步驟

蛋白定量

1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取一塊酶標(biāo)板，按照下表加入試劑

2. 根據(jù)樣品數(shù)量，將BCA試劑A與試劑B按體積比為50:1配制適量BCA工作液，充分混勻；

3. 各孔加入160μl BCA工作液；

4. 把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30sec，37℃放置30分鐘，然后在562nm下測定吸光度。以吸光值為橫坐標(biāo)，蛋白濃度（μg/μl）為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線；

5. 在酶標(biāo)板中加入2μl待測蛋白和18μl PBS（稀釋10倍），加入160μl BCA工作液，把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30sec，37℃放置30分鐘，然后在562nm下測定吸光度。

6. 根據(jù)所測樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白濃度（μg/μl），乘以樣品稀釋倍數(shù)（10）即為樣品實際濃度（單位：μg /μl）。

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