MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒自備材料以及操作過程詳解

                 MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

MTT 比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑 盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性 的檢測。MTT 檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水丌溶性的藍紫色 Formazan 并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。在特定溶劑存在的情況下，可

以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測定 570nm 波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快， 則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

eMTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒采用了自主研發(fā) Formazan solvent，使檢測本底低，靈敏度高，線性范圍寬。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、 細胞培養(yǎng)液

2、 *消化液

3、 低速離心機

4、 96 孔培養(yǎng)板

5、 細胞計數(shù)板或計數(shù)器

6、 細胞培養(yǎng)箱

7、 搖床

8、 顯微鏡

9、 酶聯(lián)免疫檢測儀

操作步驟(僅供參考)：

1、 細胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生*，常規(guī)*消化液消化細胞(懸浮細胞無需 消化)。

2、 低速離心

3、 用培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸液，并計數(shù)。

4、 細胞接種于 96 孔培養(yǎng)板，一般接種密度為 3000～10000 個細胞/孔。通常細胞增殖實 驗每孔加 3000 個細胞，細胞毒性實驗每孔加入 6000 個細胞。具體每孔所用的細胞的 數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定。

5、 37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)或按照實驗具體需要進行培養(yǎng)，一般培養(yǎng) 6～24h。

6、 按照實驗具體要求，給予 0～20μl 干預(yù)藥物處理，37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。

7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鮮培養(yǎng)液，在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù) 孵育 4h。

8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110μl Formazan solvent，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物 充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多， 溶解的時間會長一些。

9、 在酶聯(lián)免疫檢測儀 570nm 測定各孔吸光度。

注意事項：

1、 MTT solution 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。

2、 由于使用 96 孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。

3、 MTT solution 在低溫情況下會凝固，置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解后使用。

4、 Formazan solvent 可以-20℃儲存，當(dāng)產(chǎn)生沉淀或凝固時可以 37℃水浴孵育以促進溶  解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5、 觀察 formazan 是否*溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。

6、 培養(yǎng)細胞時盡量細菌避免污染。

7、 應(yīng)注意設(shè)立 OD 調(diào)零孔和對照。

8、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 個月有效。