植物激素類物質(zhì)的生理效應(yīng)及生物鑒定

一、生長素類物質(zhì)對根、芽生長的影響

【原理】

生長素及人工合成的類似物質(zhì)，如萘乙酸等一般在低濃度下對植物生長有促進(jìn)作用，高濃度則起抑制作用。根對生長素較敏感，促進(jìn)和抑制其生長的濃度均比芽低些。根據(jù)此原理可觀測不同濃度的萘乙酸對不同部位生長的促進(jìn)和抑制作用。

【儀器與用具】

恒溫培養(yǎng)箱；直徑7CM的培養(yǎng)皿7套，吸量管10Ml 2支，1Ml 1支；圓形濾紙(直徑與培養(yǎng)皿底內(nèi)徑相同)7張；尖頭鑷子1把，記號筆1支。

【試劑】

10Mg／L萘乙酸(NAA)溶液：稱取萘乙酸10Mg，先溶于少量乙醇中，再用蒸餾水定容至100Ml，配成100Mg／L萘乙酸溶液，將此液貯于冰箱中，用時(shí)稀釋10倍。【方法】

1將培養(yǎng)皿洗凈烘干，編號，在1號培養(yǎng)皿中加入已配好的10Mg／L NAA溶液10Ml，在2～6號培養(yǎng)皿中各加入9Ml蒸餾水，然后用吸管從1號皿中吸取10Mg／L NAA溶液1Ml注入2號皿中，充分混勻后即成1Mg／L NAA。再從2號皿吸1Ml注入2號皿中，混勻即成01Mg／L溶液，如此繼續(xù)稀釋至6號皿，結(jié)果從1號到6號培養(yǎng)皿NAA濃度依次為10mg/L、10mg/L、01mg/L、001mg/L、0001mg/L、00001Mg／L。zui后從6號皿中吸出1Ml棄去，各皿均為9Ml溶液。7號皿加蒸餾水9Ml作為對照。

NAA濃度

(mg/L)根數(shù)/粒平均各條根長(cm)*條種子根第二種種子根第三條種子根平均芽長

(cm)2精選小麥種子約200粒左右，用飽上清液表面滅菌20Min，取出用自來水沖凈，再用蒸餾水沖洗三次，用濾紙吸干種子表面水分。在1～7號培養(yǎng)皿中各放一張濾紙，沿培養(yǎng)皿周緣整齊地?cái)[放20粒種子，使胚朝向培養(yǎng)皿中心，加蓋后置20～25℃溫箱中，24～36H后，觀察種子萌發(fā)情況，留下發(fā)芽整齊的種子10粒。3天后，測定各處理種子的根數(shù)、根長及芽長，求其平均值，記入表15-1，確定NAA對根、芽生長具有促進(jìn)或抑制作用的濃度。

二、生長素的生物鑒定——芽鞘伸長法

【原理】

生長素能促進(jìn)禾本科植物胚芽鞘的伸長。切去頂端的胚芽鞘段，斷絕了內(nèi)源生長素的來源，其伸長在一定范圍內(nèi)與外加生長素濃度的對數(shù)呈線性關(guān)系。因此，可以用一系列已知濃度的生長素溶液培養(yǎng)芽鞘切段，繪制成生長素濃度與芽鞘伸長的關(guān)系曲線，以鑒定未知樣品的生長素含量。

【儀器與用具】

恒溫箱；搪瓷盤(帶蓋)1個；貼有毫米方格紙的玻璃板1塊；吸量管10Ml 1支，1Ml1支；鑷子1把；綠色燈泡1個；培養(yǎng)皿(直徑7CM)5套；記號筆1支；細(xì)玻璃絲若干；簡易切割刀(用有機(jī)玻璃和兩片雙面刀片制成，兩刀片間距6MM)。

【試劑】

含有2％蔗糖的磷酸—檸檬酸緩沖液(PH50)：稱取K2HPO4 1794g，檸檬酸1019g，蔗糖20g，溶于蒸餾水中定容至1L；

吲哚乙酸(IAA)溶液：稱取175Mg IAA，用上述緩沖液溶解并定容至100Ml，為0001Mol／L的IAA溶液。

【方法】

1精選燕麥(或小麥)種子100粒，浸入飽和的溶液中20Min，取出后用自來水和蒸餾水洗凈，成橫排擺放在鋪有潔凈濾紙的帶蓋搪瓷盤中。為了使胚芽鞘基部無彎曲，需將搪瓷盤斜放成40°～50°角，使胚傾斜向下，盤中加水并加蓋，置25℃暗室中培養(yǎng)。暗室以綠色燈泡照明。

2播后3天，當(dāng)胚芽鞘長度為25～35MM時(shí)，精選芽鞘長度一致的幼苗50株，用鑷子從基部取下芽鞘，再用切割器在貼有方格紙的玻璃板上切去芽鞘頂端3MM，再向下切取6MM的切段50段，放入蔗糖磷酸緩沖液中浸泡1～2H，以洗去內(nèi)源生長素。

3取洗凈烘干的培養(yǎng)皿5套，用記號筆編號，向各皿內(nèi)加PH50的蔗糖磷酸緩沖液9Ml，然后在1號皿中加0001Mol／L的IAA緩沖液1Ml，搖勻，即成10－4Mol／L的IAA溶液；再從1號皿中吸出1Ml注入2號皿，搖勻，即成10－5Mol／L IAA溶液；再從1號皿中吸出1Ml注入3號皿，搖勻，即成10－6Mol／LIAA溶液；依次操作到4號皿，配成10－7Mol／L IAA溶液，并吸出1Ml棄去。5號皿不加IAA作對照。

4從緩沖液中取出胚芽鞘切段，吸去表面水分，將切段套在玻璃絲上，注意仔細(xì)操作，勿損傷芽鞘。同一玻璃絲上可以穿2～3段芽鞘，但要留下生長的空隙。每一皿中放入10段芽鞘，加蓋，在25℃暗箱或暗室中培養(yǎng)。以上操作應(yīng)在綠光下進(jìn)行。

5培養(yǎng)24H后，取出芽鞘，在毫米方格紙上測量其長度，若能借助于雙目解剖鏡則可提高測量精度。求出每種處理的芽鞘平均長度。以處理芽鞘長度(L)與對照長度(L0)之比(L／L0)為縱坐標(biāo)，以IAA濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6對于未知濃度的生長素提取液或其他類似物溶液，均可按上述步驟求L／L0，查出標(biāo)準(zhǔn)曲線即可求得其濃度或效價(jià)。