電化學發光（ECL）原理及操作

電化學發光（ECL）原理及操作，電化學發光 （ECL） 是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應的產物之間或與體系中共存組分反應產生化學發光的現象。

電致化學發光（ECL）

ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。因此ECL反應易控制，具有靈活性。

電化學發光劑

定義：指通過在電極表面進行電化學反應而發出光的物質。

特點：
反應在電極進行
化學發光劑：三聯毗啶釕
電子供體為：三丙胺（TPA）
三聯毗啶釕分子結構圖
三聯吡啶釕 （ [Ru（bpy）3]2+ ）特點

ECL分析中采用[Ru（bpy）3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru（bpy）3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS） ，該衍生物具有水溶性，且高度穩定，保證電化學發光反應的和穩定，而且避免了本底噪聲的干擾。

，三聯吡啶釕（ [Ru（bpy）3]2+ ）特點
[Ru（bpy）3]2+衍生物與免疫球蛋白結合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；
[Ru（bpy）3]2+分子量小，空間位阻小 ，即便小分子的核酸也能標記，使檢測的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測菜單的開發前景提供了廣闊空間。

，電化學發光原理圖

ECLI是繼EIA、RIA、FIA、時間分辨熒光免疫技術（TRFIA）之后的新一代標記免疫測定技術；
ECLI是電化學發光（ECL）和免疫測定相結合的產物；
ECLI是目前的標記免疫測定技術之一。

ECLI原理
在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，用電化學發光劑三聯吡啶釕[Ru（bpy）3]2+標記Ab，通過Ag-Ab反應和磁珠分離技術，根據三聯吡啶釕在電極上發出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。

方法評價
采用的固相載體是帶有磁性的直徑約2.8 μm的聚苯乙烯微粒。其特點是反應面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；在液體中形成均勻的懸液，參與反應時類似液相，反應速度大大加快；
“鏈霉親和素-*”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；
利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便迅速，實現了的全自動化；
標記物的再循環利用，使發光時間更長、強度更高、易于測定。

ELIA*性
高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；
特異性強，重復性好，CV＜5％。
測定范圍寬，可達7個數量級。
試劑穩定，無毒害，無污染，有效期長，達數月甚至數年。
操作簡單，耗時短，易于自動化。
在對環保很重視的國家，CLIA成了取代RIA的方法。

臨床應用
激素
腫瘤標記物
內分泌功能
傳染性疾病
其它：如VB12、*、鐵蛋白、肌鈣蛋白、肌紅蛋白、酶、脂肪酸、維生素和藥物等多種檢測項目，。