蘇木素伊紅染色液的技術要點

蘇木素伊紅染色液套裝組合：Harris* 50ml，水溶性伊紅染色液 50ml，蘇木素染色分化液 50ml，蘇木素染色返蘭液 50ml

蘇木素伊紅染色是組織病理學經典的常規染色方法，歷經上百年的應用歷史至今仍*。因此，蘇木素伊紅染色是病理切片制作中極為重要的技術環節。

染色方法：
1. 切片脫蠟 二甲苯I 5分鐘，
2. 切片脫蠟 二甲苯II 5分鐘，
3. 100％1、100％2、95％1、95％2、70％梯度乙醇各30，秒鐘，
4. 自來水流水沖洗1分鐘，
5. 蘇木素染色5—8分鐘（依染液新舊調整染色時間），
6. 自來水流水沖洗1分鐘，
7. 進入分化液分化數秒鐘，
8. 自來水流水沖洗1分鐘，
9. 進入返蘭液處理5—10秒鐘，
10. 自來水流水沖洗2分鐘，
11. 進入伊紅染色液1-3分鐘，
12. 自來水沖洗30—60秒鐘，
13. 75％I、75％II乙醇脫水分色各10秒鐘，
14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脫水10秒鐘，
15. 100％乙醇1、100％2脫水30-60秒鐘，
16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分鐘，
17. 中性樹膠封固。

染色技術要點：
*在靜止由于時染液表面于空氣中的氧分子接觸極液體代表面水分蒸發會產生氧化作用并形成氧化膜。因此，在使用前應使用濾紙吸附去除氧化膜以免污染切片。一般情況下應建立良好的使用習慣，每隔2～3天將蘇木素染液*過濾一次。為保證HE切片的 恒定染色質量建議每500ml*染1200～1500張切片為宜。

*在用于免疫組織化學染色的的復染時應注意調控染色時間，核染色過淺不易辨識組織結構而核染色過深則喧賓奪主，一般復染的時間應控在10-30秒以內。此外，復染后的分化和返蘭步驟不應省略否則將造成整張切片呈淡藍色，使DAB呈現土黃色。

分化和返蘭步驟是HE染色關鍵點，應在染色 實踐中依據分化液和返蘭液的新舊調整分化和返蘭的處理時間。在使用自動染色機染切片是應注意在機械臂運行時分化液仍在進行分化反應，應適當縮短分化液處理掉時間或用70％乙醇適當稀釋分化液以免分化過度。

70％乙醇對伊紅具有分色和脫色作用，使伊紅在不同的 組織結構和 病變區域形成不同層次的 紅色。因此，伊紅染色以適當深染為宜，以便在70％乙醇分色脫水后能顯現明顯的色階和色深度。

100％乙醇和二甲苯的純凈度是保證染色后切片透明度和顯微鏡下清晰度的重要前提，在濕度較大的情況下應注意試劑的更換。干燥后封片是造成細胞核結構不清的重要原因之一，應盡可能避免。