瓊脂糖凝膠電泳介紹

瓊脂糖凝膠電泳

步驟一、用蒸餾水將電泳槽和梳子沖洗干凈.放在水平桌面上，并架好梳子.
　　

 步驟二、根據(jù)核酸分子量的大小配制不同濃度的瓊脂糖凝膠，一般200～400bp的DNA片段， 可配制1.2～1.7%濃度的瓊脂糖用于電泳.
 

步驟三、配制0.5XTBE電泳緩沖液100ml于三角燒瓶中，稱取一定量的瓊脂糖粉放入后沸水鍋 或微波爐內(nèi)加熱熔化.冷卻至60℃（需要時(shí)可加入溴乙錠），倒入電泳槽中，待凝固.
　　

步驟四、向電泳槽中倒入0.5XTBE，其量以沒(méi)過(guò)膠面2mm為宜，小心移去梳子.如樣品孔內(nèi)有 氣泡，應(yīng)設(shè)法除去.
　　

步驟五、在DNA樣品中加入0.2體積的載樣緩沖液，混勻后，加入樣品孔內(nèi).
　　

步驟六、接通電源，一般紅色為正極黑色為負(fù)極，切記DNA樣品由負(fù)極往正極泳動(dòng)（靠近加樣 孔的一端為負(fù)）.電壓為1-5V/cm（長(zhǎng)度以兩個(gè)電極之間的距離計(jì)算）.
　　

步驟七、.根據(jù)指示劑泳動(dòng)的位置，判斷是否終止電泳.一般200～400bp的PCR產(chǎn)物50V電壓， 電泳20～40min即可.
　　

步驟八、溴化乙錠染色后，紫外儀上觀察電泳帶及其位置，并與核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)比較被擴(kuò) 增產(chǎn)物的大小.