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    液相色譜(HPLC)如何選擇色譜柱

    時間:2025/2/9閱讀:29
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    HPLC高效液相色譜柱包含與支持材料鍵合的固定相(通常為多孔硅膠顆粒),以提供較大的表面積。固定相為樣本組分的分離提供了基礎。

    樣本的物理化學特性、固定相化學組成、流動相組成、流速和色譜柱溫度決定了組分通過色譜柱的速率。研究人員可從各種固定相化學組成和色譜柱尺寸(如長度、內徑和支持粒徑)中進行選擇。 

    色譜柱類型

    固定相

    流動相

    應用

    反相 (RP)

    非極性,如 C18 或苯基

    水和極性有機溶劑的混合物

    占 HPLC 分離的大多數

    正相 (NP)

    極性,如未結合硅膠

    低極性有機溶劑的混合物

    不溶于水的樣本和異構體

    親水作用 (HILIC)

    極性,如硅膠或酰胺鍵合相

    水和非極性有機溶劑的混合物

    反相液相色譜分析對高極性樣品的保留較差

    離子交換 (IEX)

    可離子化基團

    通常為鹽加緩沖液的水溶液

    可離子化樣本和大生物分子

    離子對

    非極性反相色譜柱

    非極性條件加離子配對試劑

    反相對酸或堿的保留較差

    手性

    手性基團,如多糖或環糊精

    分析物和 SP 依賴物,可以是 RP、NP、極性有機物等

    對映體(如外消旋藥物混合物)的分離/純化

    疏水相互作用 (HIC)

    非極性,短烷基鏈或苯基

    高鹽緩沖液梯度,非變性條件

    蛋白質,通常為抗體

    體積排阻 (SEC)

    惰性色譜柱,如右旋糖酐聚合物

    與含水或有機流動相配合使用

    大生物分子或合成聚合物


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