藥品質(zhì)量標準中鑒別項目設(shè)置的幾點考慮

藥品質(zhì)量標準中鑒別是用以判定某已知藥品的真?zhèn)味皇菍ξ粗幬镞M行結(jié)構(gòu)確證，所以鑒別方法應(yīng)以專屬性好、簡便易行為宜，尤其能將結(jié)構(gòu)相似的同類藥品加以區(qū)別為主要考慮因素。如新*鈉及制劑標準中僅用化學法和UV法作鑒別，難以與結(jié)構(gòu)類似物*鈉及制劑相區(qū)分，質(zhì)量標準不具備應(yīng)有的專屬性，可能給此后的市場監(jiān)督造成混亂。

常用的鑒別方法包括色譜法、光譜法、化學法和生物學方法等，可根據(jù)藥品具體特點加以選用。
色譜法（TLC法或HPLC法）利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，各自色譜行為（比移值或保留時間）的不同，與對照品在相同色譜條件下進行色譜分離，比較其色譜行為的一致性，來鑒別藥品的真?zhèn)巍＿@類方法的運用使得結(jié)構(gòu)相似化合物、同系物等的區(qū)分變得簡單易行。HPLC法雖然主要用于定量，但如果運用得當，尤其在含量測定或有關(guān)物質(zhì)項下已采用本法的情況下，利用對照品與供試品保留時間相同的特性作為鑒別依據(jù)，不必專門增加實驗以提高鑒別的專屬性，是非常可取的。值得注意的是色譜系統(tǒng)的穩(wěn)定性要好，同一物質(zhì)不同進樣時保留時間的重現(xiàn)性必須有保證。這就要求流動相與固定相相匹配，C18鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展狀態(tài)，故在C18柱的反相色譜系統(tǒng)中，流動相有機溶劑比例通常不應(yīng)低于5％，否則C18鏈的隨機卷曲將造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定導(dǎo)致組份保留值波動，不利于此種鑒別。即便如此，在實際操作中有時依然能遇到同一物質(zhì)在*相同的色譜系統(tǒng)中保留時間不一致的情況，尤其梯度洗脫時此種現(xiàn)象更為常見。藥典中對保留時間的一致性未予具體規(guī)定，此時，操作中可增加供試品溶液與對照品溶液等量混合，進樣后出現(xiàn)單一色譜峰作為鑒別依據(jù)，可以彌補該法之不足，此操作可列入質(zhì)量標準。在含量和有關(guān)物質(zhì)未采用HPLC法的情況下，一般不單獨采用本法作鑒別。

TLC法除色譜行為外，還可將斑點顏色作為鑒別依據(jù)，可由兩個因素把握供試品與對照品的同一性，而且簡便易行，堪稱一個很好的鑒別方法。但由于薄層板質(zhì)量、邊緣效應(yīng)等因素的影響，實際操作中有時也會遇到同一物質(zhì)在同一塊薄層板上的Rf值不一的情況，可比照HPLC的情況，操作中增加供試品溶液與對照品溶液等量混合，點樣后出現(xiàn)單一斑點作為鑒別依據(jù)，此點在2005年版藥典中已有體現(xiàn)。也有人提議明確Rf值偏差不超過5%,作為鑒別要求，但其可行性有待考察。單獨使用TLC鑒別時，要有色譜系統(tǒng)適應(yīng)性試驗內(nèi)容，如要求幾種結(jié)構(gòu)相似化合物的混合溶液色譜展開后應(yīng)顯示相應(yīng)的幾個斑點或zui難分離物質(zhì)對能夠分開的情況下，供試品溶液與對照品溶液主斑點的顏色與位置應(yīng)一致。
在中國藥典2005年版中，對TLC鑒別法在斑點的顏色與位置明確規(guī)定的基礎(chǔ)上對斑點大小也做出明確要求：供試品與同濃度對照品溶液顏色與位置應(yīng)一致，斑點大小應(yīng)大致相同；或供試品與對照品等體積混合，應(yīng)顯示單一，斑點緊密；或供試品溶液的主斑點與上述混合溶液的主斑點的顏色與位置一致，大小相似；或選用與供試品化學結(jié)構(gòu)相似藥物對照品，兩者的比移植應(yīng)不同（例如*與*，*磷酸鈉與*龍磷酸鈉，醋酸*與*，*龍與*，*與睪酮，*與*）；或上述兩種溶液等體積混合，應(yīng)顯示兩個清晰分離的斑點。

光譜法中IR法因可反映較多的結(jié)構(gòu)信息，在組份單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥鑒別中作為，藥物存在多晶型現(xiàn)象又無可重復(fù)轉(zhuǎn)晶方法時一般不采用此法，但如果藥物存在多晶型現(xiàn)象，且需鑒別其有效晶型，IR圖譜可以反映其有效晶型特點時，本法又是一種有效而簡便易行的鑒別方法。制劑中則因輔料影響、提取過程可能導(dǎo)致晶型變化而一般不采用IR法，而采用所受影響因素較少的UV法。
常用的UV鑒別方法有：測定zui大吸收波長，或同時測定zui小吸收波長；規(guī)定一定濃度的供試液在特定吸收波長（zui大吸收或zui小吸收）處的吸收度；經(jīng)化學處理后，測定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特征；規(guī)定幾個特定吸收波長及其吸收度比值（峰-峰、峰-谷、谷-谷）；規(guī)定幾個特定吸收波長及其吸收系數(shù)。因末端吸收所受影響因素較多，UV法鑒別時，一般不宜用220nm以下波長的吸收特性作鑒別；因反映的結(jié)構(gòu)信息少，一般也盡量不用單一吸收峰作鑒別依據(jù)；為提高專屬性，可將上述幾個方法結(jié)合起來使用。

化學鑒別法一般是特定官能團或特定結(jié)構(gòu)化合物的特性反應(yīng)，與其它鑒別方法結(jié)合使用，可以使得鑒別的專屬性更加突出。化學鑒別法具有專屬性較強、反應(yīng)迅速、現(xiàn)象明顯的特點才有使用價值。包括在適當條件下產(chǎn)生顏色、熒光，發(fā)生沉淀反應(yīng)或產(chǎn)生氣體等現(xiàn)象。
1.呈色反應(yīng)：即向供試品溶液中加入適當試劑，在一定條件下發(fā)生化學反應(yīng)，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。常見的反應(yīng)類型有：
●茚三酮呈色反應(yīng)――多為含脂肪氨基結(jié)構(gòu)的藥物；
●異羥肟酸鐵反應(yīng)――多為含芳酸及其酯類和酰胺類結(jié)構(gòu)的藥物；
●三氯化鐵呈色反應(yīng)――多為含酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基的藥物；
●重氮化偶合呈色反應(yīng)――多為芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基結(jié)構(gòu)的藥物；
●氧化還原呈色反應(yīng)或其它顏色反應(yīng)。
2.沉淀反應(yīng)：供試品溶液中加入適當試劑，在一定條件下發(fā)生化學反應(yīng)，生成不同顏色的沉淀物，有的具有特殊的沉淀形狀。常見的反應(yīng)類型有：
●與硫氰化鉻胺（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)――多為生物堿及其鹽類藥物和具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽類藥物。
●與重金屬離子的沉淀反應(yīng)――在一定條件下，藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成沉淀物。
其它沉淀反應(yīng)。
3.氣體生成反應(yīng)：供試品溶液中加入適當試劑，在一定條件下發(fā)生化學反應(yīng)，生成氣體。常見的反應(yīng)類型有：
●產(chǎn)生氨氣，利用其特殊的氣味鑒別――多為胺（銨）類藥物、酰胺類藥物經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨氣；
●產(chǎn)生硫化氫氣體，利用其特殊的氣味鑒別――多為化學結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生硫化氫氣體；
另外，含碘有機藥物，直火加熱后，可產(chǎn)生紫色碘蒸汽；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。
4.熒光鑒別：常見的熒光發(fā)射形式有以下類型：藥物本身在可見光下發(fā)射熒光；藥物溶液加硫酸呈酸性后，在可見光下發(fā)射熒光；藥物和溴反應(yīng)后，在可見光下發(fā)射熒光；藥物和*反應(yīng)后以及經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。
5.測定生成物的熔點：因操作煩瑣、費時，現(xiàn)已較少應(yīng)用。

質(zhì)量標準的鑒別項目一般選用不同原理的方法相結(jié)合以起到互補作用，同類試驗原理（如UV與IR法、HPLC與TLC法）或相同官能團的化學鑒別法盡量不同時出現(xiàn)在同一標準中。一般情況下，對于制劑來講，合適的色譜法是專屬性較好的方法，對于組份單一、結(jié)構(gòu)明確的化學原料藥講，IR法特別適合于其它方法不易區(qū)分的同類藥物。光譜法（或化學法）＋色譜法＋鹽基或酸根鑒別是一種理想的組合方式，不能說明其特性時，可增加其它方法，條目不宜過多，足以區(qū)別真?zhèn)渭纯伞?/p>