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    蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司


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    天根試劑盒-細菌基因組-DP302

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    具體成交價以合同協議為準

    產品型號

    品       牌

    廠商性質經銷商

    所  在  地蘇州市

    聯系方式:耿少華查看聯系方式

    更新時間:2023-04-09 07:59:49瀏覽次數:90次

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    經營模式:經銷商

    商鋪產品:842條

    所在地區:江蘇蘇州市

    聯系人:耿少華 (經理)

    產品簡介

    天根試劑盒-細菌基因組-DP302采用離心吸附柱和緩沖液系統,既適用于革蘭氏陰性菌基因組DNA的提取,也可適用于革蘭氏陽性菌基因組DNA的提取。

    詳細介紹

    天根試劑盒-細菌基因組 DP302


    DP302


    天根DP302

    產品簡介

        細菌基因組 DP302采用離心吸附柱和緩沖液系統,既適用于革蘭氏陰性菌基因組DNA的提取,也可適用于革蘭氏陽性菌基因組DNA的提取。

        本試劑盒也可用于食品致病菌(微生物) 基因組提取,如:、霍亂弧菌、出血性大腸桿 菌O157:H7、單增李斯特、沙門氏菌、阪崎腸肝菌等??蓮?-5 ml細菌培養液中,快速提取純化10-40 μg 純凈的基因組DNA,所得基因組DNA可直接用作PCR 模板、酶切、雜交等分子生物學實驗。

    產品特點

    ■ 簡單快速:革蘭氏陰性菌在1小時內可獲得高質量的基因組DNA。

    ■ 質量好:DNA可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學實驗。

    下游應用

    ■ 革蘭氏陰性菌基因組提取。

    ■ 革蘭氏陽性菌基因組提取。

    ■ 食品中致病菌基因組提取。

    自備試劑

    ( 革蘭氏陽性菌)、緩沖液(20 mM Tris, pH8.0; 2 mM Na2-EDTA; 1.2%Triton-100 )

    注意事項 

    請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。

     1.樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

     2.若緩沖液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,并搖勻后使用。

     3.所有的離心步驟均為使用臺式離心機,室溫下離心。

    操作步驟 使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入CH3CH2OH,加入體積請參照瓶上的標簽。

     1. 取細菌培養液1-5 ml,10,000 rpm(~11,500×g)離心1 min,盡量吸凈上清。

     2. 向菌體沉淀中加入200 μl緩沖液GA,振蕩至菌體懸浮。

     注意:對于較難破壁的革蘭氏陽性菌,可略過第2步驟,加入溶液進行破壁處 理。

    具體方法為:加入110 µl緩沖液(20 mM Tris, pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2% Triton),和70 µl溶液(50 mg/ml,客戶自備,目錄號:RT401),37 ℃處理30 min以上。如果需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(客戶自備,目 錄號:RT405-12),振蕩15 sec,室溫放置5 min。 

    3. 向管中加入20 μl Proteinase K溶液,混勻。 

    4. 加入220 μl緩沖液GB,振蕩15 sec,70 ℃放置10 min,溶液應變清亮,簡短離心以去除 管蓋內壁的水珠。

     注意:加入緩沖液GB時可能會產生白色沉淀,一般70℃放置時會消失,不會影響后續實 驗。

    如溶液未變清亮,說明細胞裂解不,可能導致提取DNA量少和提取出的DNA不 純。 

    5. 加220 μl CH3CH2OH,充分振蕩混勻15 sec,此時可能會出現絮狀沉淀,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。

    6. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中), 12,000 rpm (~13,400×g ) 離心30 sec,倒掉廢液,將吸附柱CB3放入收集管中。 

    7. 向吸附柱CB3中加入500 μl緩沖液GD,12,000 rpm (~13,400×g ) 離心30 sec,倒掉廢液,將吸附柱CB3放入收集管中。 

    8. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW,12,000 rpm (~13,400×g ) 離心30 sec,倒掉廢液,吸附柱CB3放入收集管中。

    9. 重復操作步驟8。 

    10. 將吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,倒掉廢液。

    將吸附柱 CB3置于室溫放置數分鐘,以晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

     注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,漂洗液中的殘留會影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實驗。 

    11. 將吸附柱CB3轉入一個干凈的離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 μl洗脫緩 沖液TE,室溫放置2-5 min,12,000 rpm (~13,400×g ) 離心2 min,將溶液收集到離心管 中。

     注意:洗脫緩沖液體積不應少于50 μl,體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于 洗脫效率有較大影響。

    若用ddH2O做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內,pH值低 于7.0會降低洗脫效率;且DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。

        為增加基因組 DNA的得率,可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室溫放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g )離心2 min。

     DNA濃度及純度檢測

        得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關?;厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD260處有吸收峰,OD260值為1相當于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml 單鏈DNA。 OD260/OD280比值應為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用ddH2O,比值會偏 低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。

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    關鍵詞:離心機 光度計

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