光吸收酶標儀主要由哪些結(jié)構(gòu)組成？

　　光吸收酶標儀結(jié)合了紫外可見光分光光度計及微孔板讀板機功能于一體，為眾多檢測如 ELISA、核酸和蛋白定量以及微生物生長提供了多重選擇且更加便利。
 

　　一、測定波長
 

　　目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在H?O?溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時，DAB在450nm波長處有吸收，當(dāng)pH值降為L0時，吸收波長移至492nm,同時摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有消光系數(shù)，如果HRP量少，H:O:和TMB過量時，則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。酶標儀有單波長和雙波長檢測功能有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定；而“雙波長”則除了用對顯色具吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定外，同時用對特異顯色不敏感的波長如630nm進行測定，酶標儀打印出來的吸光度則為二者之差。630nm波長下得到的吸光度是非特異的，來自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測定中，使用雙波長，且不必設(shè)空白孔。

 

　　二、測定的吸光度范圍
 

　　酶標儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。
 

　　三、光學(xué)系統(tǒng)
 

　　光吸收酶標儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個參比通道，每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標也應(yīng)較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
 

　　四、檢測速度
 

　　光吸收酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過程中，因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。