Gq 蛋白偶聯受體激活過程通常借助于具有熒光功能的微孔板讀板機來實時監測鈣敏感的熒光染料與細胞內鈣離子的結合來實現。通常我們會通過微孔板讀板機內的自動移液裝置將激動劑化合物加到預鋪細胞的孔板中,然后讀板機檢測系統實時監測化合物引起的熒光強度值的變化,對動力學檢測結果進行分析,可以得到關于化合物響應曲線的一些信息,其中包括激動劑和拮抗劑的 EC50 和 IC50 值。
在本篇應用文獻中,我們介紹了如何利用配有注射器模塊的 SpectraMax®i3x 多功能微孔板讀板機來對兩種不同的細胞系進行鈣離子濃度測定。CHO M 1 WT 3 是采用中國倉鼠卵巢細胞穩定轉染 M 1 毒蕈堿的 Gq 受體細胞,1321N 1 是人星形細胞瘤細胞系具有內源性毒蕈堿膽堿能受體,借助于 SoftMax®Pro 軟件的數據分析功能精確獲得兩個細胞系的EC50 和 IC50 值,我們與以前使用高通量篩選系統獲得的結果進行比較。在軟件的Acquisition Editor 界面下,流程化界面方便我們設置注入器的相應參數 ( 圖 1 所示 )。
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