BCA 法是一種通過比色分析來對蛋白質進行定量的方法。該方法利用蛋白在堿性環境中將 Cu2+ 還原成 Cu+,BCA 與 Cu+ 形成有顏色的絡合物。該水溶液絡合物在特定波長下有強烈的吸光值,且在一定范圍內蛋白濃度與光吸收值成正比,這就使得我們可以利用微孔板讀板機進行高通量、高靈敏度的蛋白定量檢測。早期的 PierceTMBCA 蛋白檢測試劑盒需要 37℃ 孵育 30 分鐘,在 562 nm 處檢測光吸收變化。
新版Pierce Rapid Gold BCA 蛋白檢測試劑盒僅需室溫孵育 5 分鐘就會產生強烈的橙-金絡合物,在 480 nm 處檢測。SpectraMax iD5 多功能微孔板讀板機具有光吸收檢測功能,可以進行蛋白定量
檢 測 。 下 面 , 我 們 介 紹 一 下 如 何 用SpectraMax iD5 配套 SoftMax®Pro 軟件,用 Pierce BCA 蛋白檢測試劑盒和 PierceRapid Gold BCA 蛋白檢測試劑盒進行檢測。以上試劑盒均包括標準品牛血清白蛋白,SoftMax Pro 預設的模板可以根據標準曲線將待測蛋白的濃度自動計算出來。Pierce Rapid Gold BCA 蛋白檢測試劑盒僅需室溫孵育 5 分鐘相比 Pierce BCA 試劑盒 37℃ 孵育 30 分鐘,可節省大量時間且提高操作簡便性。
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