報(bào)告基因是研究細(xì)胞通路激活相關(guān)基因表達(dá)的重要工具。細(xì)胞轉(zhuǎn)染含有報(bào)告基因和感興趣基因序列的質(zhì)粒,通常是啟動子或其他轉(zhuǎn)錄控制元件。當(dāng)啟動子激活時,報(bào)告基因表達(dá)且可測定其表達(dá)水平。
螢火蟲熒光素酶是普遍使用的報(bào)告基因。其發(fā)光信號所提供的靈敏度相比熒光和其他方法更優(yōu)。第二種發(fā)光報(bào)告基因是海腎熒光素酶,通常作為組成型啟動子的對照,用以標(biāo)準(zhǔn)化諸如轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞數(shù)量等差異。由于螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶使用不同的底物,所以兩者可在同一個孔中使用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測。
SpectraMax® DuoLuc Reporter Assay 試劑盒可實(shí)現(xiàn)在微孔板中使用螢火蟲和海腎熒光素酶進(jìn)行高靈敏度定量實(shí)驗(yàn)。添加螢火蟲工作液到樣品孔可啟動螢火蟲發(fā)光反應(yīng),然后在加入海腎工作液可淬滅螢火蟲熒光素酶反應(yīng)同時啟動海腎熒光素酶發(fā)光反應(yīng)。
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