今天給大家分享一篇2019年發(fā)表在《Nature Methods》雜志上的文章。作者設計了一種生物發(fā)光的探針BiGluc，利用該探針即可在體內(nèi)、體外實時、無創(chuàng)的長期監(jiān)測葡萄糖的攝取。

葡萄糖是大多數(shù)生物體能量的主要來源，其異常攝取與許多病理條件有關(guān)，如腫瘤、糖尿病、神經(jīng)退行性疾病、非酒精性脂肪性肝炎等。到目前為止，基于¹⁸FDG的正電子發(fā)射斷層成像（PET）仍然是測量葡萄糖攝取的金標準。還沒有光學成像技術(shù)能夠很好的檢測該指標。

文章中作者設計了一種可以可視化和定量葡萄糖吸收的光學探針。該探針是基于結(jié)合籠狀螢光素技術(shù)與生物正交‘點擊’反應，即可激活的籠狀螢光素三芳基膦酯（CLP）與全氟苯基疊氮基修飾的葡萄糖（GAz4）分子之間產(chǎn)生的生物正交點擊反應，該反應導致游離螢光素的釋放，此時在螢光素酶的存在下，即可產(chǎn)生可量化的生物發(fā)光信號，其信號強度與葡萄糖的代謝水平相關(guān)。在活體成像中，首先是表達螢光素酶的動物注射CLP, 24小時后注射GAz4，注射后即可使用IVIS 小動物活體成像系統(tǒng)進行成像，如下圖所示。

圖1.  BiGluc.探針的設計策略

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為了研究BiGluc探針在活體水平的應用，文中使用基因工程鼠FVB-luc^+/+【該小鼠通過β-actin啟動子廣泛的表達螢光素酶】來進行評價。在三組FVB-luc^+/+小鼠中，首先尾靜脈注射CLP溶液，24h后分別灌胃GAz4（BiGluc組)、GAz4+d-葡萄糖(BiGluc+d-葡萄糖組)或PBS(背景組)。

結(jié)果顯示，d-葡萄糖（1:300 ratio with the GAz4 probe）的競爭能夠?qū)iGluc信號進行抑制，使得信號值下降至背景值。從而成功證明BiGluc探針與天然底物存在競爭（下圖a-c）。

為了進一步研究BiGluc和d-葡萄糖的在體內(nèi)的選擇性，作者進行了胰島素耐受性試驗。高水平的胰島素會導致GLUT4易位到細胞膜，隨后組織對d-葡萄糖攝取的增加。因此實驗中FVB-luc^+/+小鼠靜脈注射CLP，24h后注射GAz4 結(jié)合 PBS溶液(對照組)或者胰島素，隨后進行生物發(fā)光成像，結(jié)果顯示胰島素處理組小鼠的信號增加了三倍（下圖d）。

圖2. 轉(zhuǎn)基因小鼠(FVB-luc^+/+)中d-葡萄糖攝取的成像和定量

這些實驗結(jié)果表明，BiGluc探針可以可靠地用于可視化研究活體水平d-葡萄糖的攝取，并且可以進行定量，從而也提示該探針可用于糖尿病等代謝疾病的研究。

同樣，該探針可用于腫瘤葡糖糖攝取的研究。葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白，特別是GLUT1，在多種類型腫瘤發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。實驗中使用裸鼠接種4T1-luc或4 T1-luc-GLUT1^−/−細胞，腫瘤生長至體積65mm³，所有的動物注射等量的螢光素，以確保腫瘤的大小和螢光素酶的表達量相同。

如前所示，進行BiGluc探針成像實驗。實驗結(jié)果表明，與對照組相比，4T1-luc-GLUT1^−/−發(fā)光強度降低38%。同樣文中還研究了BiGluc信號是否可以通過化學抑制GLUT1轉(zhuǎn)運體來調(diào)節(jié)。*，WZB-117是一種小分子的GLUT1可逆抑制劑，能夠在不同的癌癥中有效地阻止葡萄糖的攝取。結(jié)果顯示W(wǎng)ZB-117處理組，葡萄糖攝取信號減少50%（下圖c,d）。同樣文中比較了BiGluc 探針和¹⁸F-FDG-PET在腫瘤移植體中的應用效果。結(jié)果顯示 4T1-luc-GLUT1^−/-細胞對葡萄糖的攝取量降低，與BiGluc探針成像結(jié)果一致（下圖e,f）。

圖3. 使用BiGluc和¹⁸F-FDG探針對腫瘤異種移植模型中d-葡萄糖的攝取進行成像和定量

這些結(jié)果都證明了BiGluc探針在研究機體葡萄糖攝取中強大的功能。相信這項技術(shù)可以廣泛應用于藥物研發(fā)以及監(jiān)測與葡萄糖攝取異常相關(guān)疾病的發(fā)生和進展，如癌癥、糖尿病和肥胖等。此外，BiGluc技術(shù)擴大了生物發(fā)光成像技術(shù)可檢測的生物分子的范圍。在未來，利用新的紅移螢光素-螢光素酶組合技術(shù)可以進一步提高BiGluc探針靈敏度，將進一步擴大其應用范圍。

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/articles/s41592-019-0421-z